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Orientador | dosSantos, Washington Luis Conrado | |
Autor | Tavares, Maria Brandão | |
Fecha de acceso | 2017-08-02T13:53:36Z | |
Fecha de disponibilización | 2017-08-02T13:53:36Z | |
Fecha de publicación | 2017 | |
Referencia | TAVARES, M. B. Marcadores biológicos para necrose tubular aguda em pacientes com doença glomerular. 2017. 100 f. il. Tese (Doutorado em Patologia) – Universidade Federal da Bahia. Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Gonçalo Moniz, Salvador, 2017. | pt_BR |
URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/20489 | |
Resumen en Portugués | INTRODUÇÃO: A lesão renal aguda (LRA) é uma complicação frequente em pacientes com glomerulopatias, acomentendo até 34% dos adultos com síndrome nefrótica (SNO) idiopática. O diagnóstico diferencial de necrose tubular aguda (NTA) de glomeulonefrite proliferativa ou crescêntica em pacientes com SNO e LRA é fundamental, visto que a NTA pode mimetizar quadro de glomerulonefrite rapidamente progressiva. Dados clínicos e laboratoriais podem ser úteis no diagnóstico diferencial da LRA na SNO, entretanto a distinção entre NTA e glomerulonefrite proliferativa ou crescêntica é feito pela biópsia renal, procedimento invasivo e que não está disponível amplamente. Novos biomarcadores para diagnóstico precoce e preditores diagnósticos na LRA têm sido identificados. OBJETIVOS: Neste trabalho nós avaliamos o uso de testes baseados nas concentrações urinárias de kidney injury molecule-1 (KIM-1), neutrophil gelatinase-associated lipocalin NGAL, interleukin-18 (IL-18) e β2-microglobulin (β2M) para diagnóstico diferencial de NTA em pacientes com SNO e examinamos a associação das concentrações urinárias destes marcadores com lesão histológica consistente com NTA ou lesões glomerulares proliferativas. Adicionalmente, estudamos as diferenças na expressão de proteínas na urina de pacientes com SNO, com e sem NTA estabelecida histologicamente, por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) que poderia ser útil na identificação de novos marcadores para NTA. MATERIAL E MÉTODO: Foram coletadas amostras de urina de 40 pacientes submetidos à biópsia renal para fins de diagnósticos e encaminhadas para o CPQGM-FIOCRUZ. Os pacientes foram divididos em 3 grupos de acordo com a presença ou ausência de NTA histologicamente definida; e presença de glomerulonefrite proliferativa: grupo CON sem necrose tubular ou lesão proliferativa glomerular (n=17), grupo GNTA com necrose tubular e sem proliferacao glomerular (n=14), e grupo GNP com lesão proliferativa glomerular incluindo crescentes independente da presença de NTA (n=9). LRA foi definida utilizando os critérios KDIGO. Foi coletada amostra de urina previamente à realização da biópsia renal, centrifugada a 2000 xg a 4°C e o sobrenadante armazenado a - 80°C em alíquotas de 1 ml. As mensurações das concentrações dos biomarcadores foram realizadas utilizando imunoensaio enzimático (ELISA). A extração de proteína urinária foi realizada pelo método de precipitação da acetona. As concentrações proteícas das amostras foram dosadas pelo método do ácido bicicrônico (Micro BCA) e Bradford. As amostras de proteína (50μg) foram analisadas em SDS-PAGE a 15% na presença de dodecil sulfato de sódio. RESULTADOS: A média de idade foi de 35 ± 16 anos, 22 (55%) eram mulheres, os principiais diagnósticos histológicos foram glomeruloesclerose segmentar e focal (GESF) (10, 25%), glemorulonefrite membranosa (GNM) (10, 25%), Lesão Mínima (LM) (7, 18%), nefrite lúpica (NL) (6, 15%) e glomerulonefrite proliferativa (3, 8%). Os pacientes com NTA tiveram maiores concentrações urinárias de KIM-1 (P = 0,016), NGAL (P = 0.023) e β2M (P = 0,017) em comparação aos pacientes sem NTA. As concentrações urinárias de KIM-1 (P= 0,009) e NGAL (P= 0,002) também foram maiores nos pacientes com LRA comparado aos paciente sem LRA. As dosagens de NGAL (P = 0,034) e KIM-1 (P=0,024) urinários foram significamente maiores nos pacientes com NTA sem lesão glomerular proliferativa em comparaçao aos pacientes com glomerulonefrites proliferativas. Na análise das proteínas em SDS-PAGE, observamos a expressão de banda proteica com peso molecular 35 KDa apenas nos pools de pacientes do grupo CON e desaparecimento de fração protéica correspondente a 28 KDa nos pools de pacientes do grupo GNP. CONCLUSÕES: As concentrações urinárias de KIM-1 e NGAL foram capazes de distinguir pacientes com e sem LRA, mesmo na presença de síndrome nefrótica; e as dosagens de NGAL e KIM-1 urinárias podem ser úteis no diagnóstico diferencial entre NTA e glomerulonefrite proliferativa em pacientes com síndrome nefrótica. A presença de lesão proliferativa glomerular ou necrose tubular aguda resulta no desaparecimento de uma fração protéica de 35 kDa, e a lesão proliferativa, no desaparecimento de fração protéica de 28 kDa da urina de pacientes com SNO. O estudo dessas frações protéicas pode contribuir para novas estratégias no diagnóstico diferencial da NTA em pacientes com SNO. | pt_BR |
Promoción | CNPq; CPqGM; FAPESB; FIOCRUZ | pt_BR |
Idioma | por | pt_BR |
Editor | Instituto Gonçalo Moniz | pt_BR |
Derechos de autor | open access | pt_BR |
Palabras clave en Portugués | Necrose tubular aguda | pt_BR |
Palabras clave en Portugués | Síndrome nefrótica | pt_BR |
Palabras clave en Portugués | Lesão renal aguda | pt_BR |
Título | Marcadores biológicos para necrose tubular aguda em pacientes com doença glomerular | pt_BR |
Tipo del documento | Thesis | pt_BR |
Fecha de la defesa | 2017-04-07 | |
Departamiento | Coordenação de Ensino | pt_BR |
Instituición de defensa | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz | pt_BR |
Local de defensa | Salvador/Ba | pt_BR |
Programa | Pós-Graduação em Patologia | pt_BR |
Resumen en Inglés | INTRODUCTION: Acute kidney injury (AKI) is a common complication in patients with nephrotic syndrome (NS), and it is reported in 34% of adults with idiopathic nephrotic syndrome. Emergence of AKI in the course of nephrotic syndrome requires a prompt differential diagnosis between acute tubular necrosis (ATN) and proliferative glomerular lesions leading to rapidly progressive glomerulonephritis. Although clinical and conventional laboratory clues can be decisive in many cases, sometimes such distinctions rely on renal biopsy, which is an invasive procedure and is not available in many centers. Several new biomarkers have emerged, increasing the perspective on early diagnosis and the prognostic prediction of AKI. OBJECTIVES: In this work, we studied the use of tests based on the urinary concentrations of kidney injury molecule-1 (KIM-1), neutrophil gelatinase-associated lipocalin NGAL, interleukin-18 (IL-18) and β2-microglobulin (β2M) for the diagnosis of ATN in patients with NS and examined the association of urinary concentration of these biomarkers with histological lesions consistent with ATN or proliferative glomerular lesions. Furthemore, we analyzed differences in urinary protein expression of patients with NS, with and without histological evidence of ATN, using sodium dodecil sulfate -polycarylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) that could be useful for the developmente of new biomarkers for ATN. METHODOLOGY: Urinary samples from 40 patients with nephrotic syndrome subjected to renal biopsy between 2012 january and 2013 december and analyzed at CPQGM-FIOCRUZ were colected. Patients were divided in 3 groups: group CON, patients without proliferative glomerulopathy or ATN (n=17); group GNTA, patients with ATN but without proliferative glomerulopathy (n=14); and group GNP, with proliferative glomerular lesion (n=9). AKI was defined using the KDIGO criteria. Urine sample was obtained before renal biopsy procedure, centrifuged at 2000 xg, 4°C; and the supernatant stored at -80°C. The urinary concentrations of the biomarkers were estimated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Urinary protein extraction was performed by acetone precipitation method. Protein concentration was measured using bicichronic acid (Micro BCA) and Bradford. The urinary protein samples (50 μg) were analyzed in 15% SDS-PAGE. RESULTS: The mean age of the 40 patients was 35 ± 16 years. The main histological diagnosis of Focal and Segmental Glomerulosclerosis (10, 25%), Membranous Glomerulopathy (10, 25%), Minimal Change Disease (7, 18%), Lupus Nephritis (6, 15%) and Proliferative Glomerulonephritis (3, 8%). The patients with ATN had higher levels of urinary KIM-1 (P = 0.016), NGAL (P = 0.023) and β2M (P = 0.017) than patients without ATN. The urinary concentrations of KIM-1 (P= 0.009) and NGAL (P= 0.002) were higher in patients with AKI than in patients without AKI. Urinary NGAL (P=0.034) and KIM-1 (P=0.024) levels were significantly higher in patients with ATN without proliferative glomerulonephritis than in patients with proliferative glomerulonephritis. Regard protein analyzes with SDS-PAGE, expression of a protein fraction with 35 KDa molecular weight in pool samples of patients from CON group was observed that was not present n other groups. A protein fraction with 28 KDa molecular weight that was observed in CON and GNTA groups samples was lacking in pool samples from patients of GNP group. CONCLUSIONS: Urinary NGAL and KIM-1 estimates were able to discriminate patients with AKI even in conditions of NS. Furthermore, urinary levels of NGAL and KIM-1 may be useful in the differential diagnosis of ATN and exudative glomerulonephritis in patients with nephrotic syndrome. The presence of proliferative glomerular lesion or ATN was associated with lack of protein fraction of 35 KDa, and proliferative glomerular lesion with lack of protein fraction of 28 kDa in NS patients urine. The identification of proteins present in these SDS-PAGE fractions, can be useful for developing new strategies for AKI diagnosis in NS patients. | pt_BR |
Afiliación | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil | pt_BR |
Palavras clave en Inglês | Acute tubular injury | pt_BR |
Palavras clave en Inglês | Nephrotic syndrome, | pt_BR |
Palavras clave en Inglês | Acute kidney injury | pt_BR |
Miembros de la junta | Marchini, Fabricio Klerynton | |
Miembros de la junta | Santiago, Mittermayer Barreto | |
Miembros de la junta | Neves, Carolina Lara | |
Miembros de la junta | Athanazio, Daniel Abensur | |
Miembros de la junta | dosSantos, Washington Luis Conrado |