Estudo da imunopatologia no cérebro/cerebelo de camundongos infectados com DENV-2 por via intravenosa e em casos fatais: histopatologia, detecção viral e citocinas

Abstract

O vírus da dengue não é mais considerado um vírus não-neurotrópico, já que nas últimas epidemias, manifestações neurológicas estão se tornando cada vez mais comuns, como encefalopatias, encefalites, síndromes imuno-mediadas (mielite transversa aguda, encefalomielite aguda disseminada e síndrome de Guillain-Barré), disfunção muscular e desordens neurofltálmicas. Para avançar neste campo, alguns modelos animais estão sendo desenvolvidos, mesmo com a falta de um modelo animal imunocompetente para dengue que mimetize a doença como nos humanos. O objetivo deste trabalho foi comparar os achados do modelo murino com casos fatais de dengue, no que se refere à histopatologia, detecção de antígenos virais e citocinas envolvidas. Camundongos BALB/c foram infectados com DENV-2 não-neuroadaptado pela via intravenosa. Coloração histológica, microscopia eletrônica e imunohistoquímica foram realizadas no modelo murino para caracterizar os aspectos histopatológicos e ultraestruturais e detecção de antígenos virais e citocinas. Os animais infectados não exibiram sinais clínicos, mas a análise histopatológica do cérebro e cerebelo revelou principalmente áreas com infiltrados inflamatórios, gliose, hemorragia e edema. Células gliais (microglia e astrócitos) estavam alteradas em sua morfologia e quantidade, sugerindo ativação em decorrência da infecção A replicação viral ocorreu em células endoteliais, microglia e neurônios dos animais infectados. A avaliação ultraestrutural mostrou neurônios, microglia e astrócitos com alterações indicativas de apoptose. Além disso, células CD8+ e citocinas, como TNF-\03B1, IFN-\03B3 e RANTES, que podem estar envolvidas na neuropatogênese da dengue, também foram detectadas. Em experimentos "in vitro\201D, culturas de células neurais mistas foram infectadas com DENV-2, e a evidência da replicação do vírus foi mostrada pela detecção da proteína NS3, uma proteína não-estrutural, que esteve presente em microglia. Além do modelo animal, os casos fatais de DENV-2 e DENV-3 foram investigados. A análise histopatológica mostrou dano tecidual e células neuronais alteradas, diferente do controle. O recrutamento de microglia, células CD8+, antígenos virais e citocinas (TNF-\03B1, IFN-\03B3 e RANTES) também foram detectados. Ainda neste contexto, a barreira hematoencefálica foi caracterizada no modelo murino e em casos fatais, onde as células endoteliais foram detectadas em áreas com disfunção vascular. De uma maneira geral, estes achados irão contribuir para o melhor entendimento sobre os principais tecidos e células do sistema nervoso central, envolvidos na patogênese da dengue em correlação com os estudos de amostras de tecidos de casos fatais, contribuindo significativamente para o conhecimento da doença, novas vacinas e métodos terapêuticos contra a doença.