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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/28585
AVALIAÇÃO DA TÉCNICA NESTED-PCR NO DIAGNÓSTICO DE SCHISTOSOMA MANSONI EM CARAMUJOS E AMOSTRAS BIOLÓGICAS HUMANAS
Reação em Cadeia da Polimerase/métodos
Schistosoma mansoni/isolamento & purificaçäo
DNA de helmintos/genética
Sensibilidade e Especificidade
Benchmarking/métodos
Estudos de avaliação
Humanos
Wanderley, Leandro Batista | Date Issued:
2017
Alternative title
Nested-PCR evaluation for the diagnosis of Schistosoma mansoni in snails and human biological samplesAuthor
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract in Portuguese
As técnicas diagnósticas para a esquistossomose apresentam baixa acurácia, tornando-se
necessárias novas técnicas para seu diagnóstico. O objetivo do estudo foi avaliar o
desempenho de dois sistemas Nested PCR (NPCR) para o diagnóstico de S. mansoni em
caramujos e amostras humanas. Foram otimizados quatro ensaios de PCRs simples testando
diferentes concentrações de primers e magnésio. Em seguida, esses sistemas foram
combinados em duas NPCRs. A sensibilidade dos sistemas foi avaliada nas concentrações
entre 1ng e 0,1fg de DNA genômico de S. mansoni e a especificidade com DNA de cercária
ave. Nas amostras humanas, a NPCR1 foi avaliada apenas em DNA extraído de amostras de
LCR (n=50) de pacientes com ou sem neuroesquistossomose. A NPCR2 foi avaliada em
amostras de sangue e urina de indivíduos infectados (n=99) e não infectados (n=21). Para os
caramujos, o sistema NPCR2 foi avaliado por mimetismo da infecção em lotes de B. glabrata
(n=50), adicionando diferentes concentrações de DNA (1ng, 10pg e 10fg) antes da extração, e
através de lotes contendo diferentes quantidades de caramujos infectados em laboratório. A
NPCR2 foi cem vezes mais sensível que a NPCR1 amplificando 0,1fg de DNA. Os dois
sistemas amplificaram o DNA da cercaria de ave, mas apenas a NPCR2 conseguiu distinção
entre as bandas. A NPCR1 apresentou 80% de sensibilidade, 100% de especificidade e valor
preditivo positivo, 88% de valor preditivo negativo e 92% de acurácia no LCR. Já a NPCR2
apresentou uma melhor sensibilidade para as amostras de urina, apresentando baixa acurácia
no sangue. Para o mimetismo em caramujos, o sistema de NPCR2 amplificou 1ng de DNA, e
o lote contendo 1 caramujo com 5 dias de infecção. Conclui-se que a técnica permite o
diagnóstico da doença em caramujos e amostras humanas, principalmente em pacientes com
neuroesquistossomose.
Abstract
Diagnostic techniques for schistosomiasis present low accuracy and new techniques for
diagnosis are necessary. The objective of this study was to evaluate the performance of two
Nested PCR (NPCR) for the diagnosis of S. mansoni in snails and human samples. Four PCRs
protocols were optimized by testing different concentrations of primers and magnesium.
These systems were then combined into two NPCRs. The sensitivity of the systems was
evaluated at concentrations between 1ng and 0.1fg of S. mansoni genomic DNA and
specificity with avian cercariae DNA. In human samples, NPCR1 was evaluated only in DNA
extracted from CSF samples (n = 50) from patients with or without neuroschistosomiasis.
NPCR2 was evaluated in blood and urine samples from infected (n = 99) and non-infected (n
= 21) individuals. For snails, the NPCR2 system was evaluated by mimicking the B. glabrata
(n = 50) batch infection, adding different concentrations of DNA (1ng, 10pg and 10fg) prior
to extraction, and by lots containing different amounts of snails infected in the laboratory.
NPCR2 was one hundred times more sensitive than NPCR1 by amplifying 0.1fg of DNA. The
two systems amplified the DNA of the avian cercaria, but only the NPCR2 managed to
distinguish between the bands. NPCR1 showed 80% sensitivity, 100% specificity and positive
predictive value, 88% negative predictive value and 92% accuracy in CSF samples. On the
other hand, the NPCR2 presented a better sensitivity for the urine samples, presenting low
accuracy in the blood. For mimicry in snails, the NPCR2 system amplified 1ng of DNA, and
the batch containing 1 snail with 5 days of infection. It is concluded that the technique allows
the diagnosis of the disease in snails and human samples, mainly in patients with
neuroschistosomiasis.
DeCS
Esquistossomose mansoni/diagnósticoReação em Cadeia da Polimerase/métodos
Schistosoma mansoni/isolamento & purificaçäo
DNA de helmintos/genética
Sensibilidade e Especificidade
Benchmarking/métodos
Estudos de avaliação
Humanos
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