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IMUNO-REGULAÇÃO POR CITOCINAS NA TUBERCULOSE PULMONAR. AVALIAÇÃO PELA TÉCNICA DE SANGUE TOTAL
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Resumen en portugues
A tuberculose continua sendo um importante problema de saúde pública no Brasil e no mundo, por este motivo, é preciso desenvolver estudos para o entendimento da resposta imune associada à proteção ou à imunopatologia desta doença. Alguns relatos demonstram que manifestações clínicas da tuberculose se correlacionam com a produção de citocinas. O IFN-7 tem sido implicado na proteção contra o M. tuberculosis, enquanto citocinas deativadoras de macrófagos como IL-10, se correlacionam com a progressão da doença. O TNF-a pode participar da gênese das lesões teciduais. Contudo, esta visão parece simplificada, e é necessário avaliar os níveis destas citocinas em grupos de pacientes bem caracterizados para validar clinicamente esta hipótese. [OBJETIVO]. Avaliar o perfil de IFN-y, lL-10 e TNF-a, produzido pelas células do sangue total de pacientes em diferentes estágios da tuberculose pulmonar, em resposta ao PPD e ao antigeno total do Mycobacterium tuberculosis.[ PACIENTES E MÉTODOS]. Vinte e dois pacientes com tuberculose pulmonar em diferentes estágios de evolução (mínima,n=7; moderada,n=8; avançada,n=7 segundo a classificação da American Thoracic Society) foram incluídos neste estudo. Sangue total heparinizado destes indivíduos foi colhido e posteriormente diluído (1:10) em RPMI 1640 suplementado com L-glutamina e gentamicina e aliquotados em 1 ml por poço. As culturas foram estimuladas com 20 |ig/ml de PPD, 5 |xg/ml de filtrado de cultura do M. tuberculosis ou mantidas em cultivo na ausência de antigeno. O sobrenadante foi colhido após 72 horas de incubação. Todas as amostras foram avaliadas por teste de ELISA Sandwich para dosagem de IFN-y (Endogen, MA), IL-10 (Genzyme,MA) e TNF-a (Genzyme,MA). [RESULTADOS]. Existe uma correlação negativa entre os níveis de IFN-y nos estágios clínicos da tuberculose, ao contrário os níveis de TNF-a e lL-10 apresentam correlação positiva e significante com os estágios mais avançados da tuberculose pulmonar. A produção de IFN-y em resposta ao estímulo de PPD in vitro foi de 861 pg/ml no estágio mínimo, 255 pg/ml no estágio moderado e 56 pg/ml no estágio avançado; a produção de TNF-a com o estímulo de PPD foi de 30 pg/ml para o estágio mínimo, 70 pg/ml para o estágio moderado e 68 pg/ml para o estágio avançado; e a lL-10 estimulada com PPD apresentou 19 pg/ml para o estágio mínimo, 16 pg/ml para o estágio moderado e 38 pg/ml para o estágio avançado. [CONCLUSÕES]: Há um predomínio de diferentes citocinas nos estágios mínimo, moderado e avançado da tuberculose pulmonar. No estágio mínimo predomina IFN-y e no estágio avançado, há um predomínio de TNF-a e lL-10. Os resultados reforçam que IL-10 e TNF-a estão associados com progressão da doença.
Resumen en ingles
Tuberculosis is an innportant public health problem worldwide and an increasing problem in Brazil. There are important obscure points in the pathogenesis of human tuberculosis which need to be addressed. Protection against tuberculosis is ascribed to cell-mediated immunity, and IFN-7 is the major cytokine involved in macrophage activation and mycobacteria destruction. IL-10, and other macrophage deactivating cytokines, are implicated in disease progression. TNF-a has been shown to be important for macrophage activation ,but it is also implicated in tissue destruction. The relationship of the different phases of human tuberculosis to the production of such cytokines is not known in well characterized patients. [OBJECTIVE] To evaluate the profile of IFN-y, IL-10 and TNF-a produced in response to PPD or crude M. tuberculosis antigen in the whole blood from patients with pulmonary tuberculosis at minimal, moderate or advanced phases of the disease. [PATIENTS, MATERIAL AND METHODS] Twenty-two patients with pulmonary tuberculosis (minimal, n=7; moderate, n=8; advanced, n=7) were included in this study. Disease was diagnosed by clinical and laboratory (culture, sputum smear and chest X - ray) data. Disease extension followed the recommendations of the American Thoracic Society. Heparinized whole blood was diluted 1:10 with RPMI 1640 containing L- glutamine and gentamicin. One ml of diluted blood (1ml per well in 24-well plates), were left unstimulated, or stimulated with PPD (20|ig/ml) or M. tuberculosis antigen (5|o.g/ml). Cultures were incubated at 37°C in a humid atmosphere with 5%C02, and cell-free supernatants were collected after 72h. Cytokines were measured using commercial reagents in a sandwich ELISA for IFN-y (Endogen,MA), IL-10 (Genzyme, MA) and TNF-a (Genzyme, MA). [RESULTS]: There is negative correlation between the levels of IFN-y and the extension of disease. Both, IL-10 and TNF-a correlated positively with the extension of disease. IFN-y production in response to PPD was 861 pg/ml, in minimal disease, 255 pg/ml in moderate disease and 56 pg/ml in advanced. The levels of TNF-a were 30 pg/ml in minimal, 70 pg/ml in moderate and 68 pg/ml in advanced pulmonary tuberculosis. IL-10 was 19 pg/ml, 16 pg/ml and 38 pg/ml in minimal, moderate and advanced tuberculosis respectively.[CONCLUSIONS] There is a predominance of different cytokines during the different stages of disease. The presence of high amounts of TNF-a and IL-10 in patients with advanced disease reinforces in man the experimental data of association of these cytokines with disease progression.
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