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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34298
AVALIAÇÃO DA TAXA DE INFECÇÃO IN VITRO DE CÉLULAS-TRONCO HUMANAS DERIVADAS DA MEDULA ÓSSEA POR LEISHMANIA INFANTUM E O IMPACTO DA INFECÇÃO NA HEMATOPOESE E NOPERFIL FENOTÍPICO-FUNCIONAL DAS PROGÊNIES
Gontijo, Raquel Carvalho | Data do documento:
2017
Autor(es)
Orientador
Coorientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Resumo
A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença letal, de caráter zoonótico que atinge milhares de pessoas no Brasil. Existem diversos fatores que aumentam a susceptibilidade à LV e a imunossupressão é um fator de risco bem estabelecido. A leishmaniose pós-imunossupressão é caracterizada por um aumento no número de parasitos na medula óssea com consequentes desordens hematopoéticas, além de manifestações clínicas não
convencionais. No presente estudo, utilizamos uma nova abordagem, infectando células-tronco hematopoéticas humanas derivadas da medula óssea com Leishmania (Leishmania) infantum. Utilizando esta estratégia, mostramos através da citometria de fluxo, que as CTH são capazes de fagocitar formas promastigotas de L. (L.) infantum e produzir as citocinas IL-
4, IL-10 IFN-γ e principalmente TNF-α. Além disso os resultados deste estudo demonstraram que a infecção por L. (L.) infantum aumenta a hematopoese in vitro, favorecendo o desenvolvimento de colônias da linhagem eritroide, por meio de um mecanismo ainda desconhecido que parece envolver a expressão de SIRT1. No presente estudo, observamos
também que a infecção de CTH por L. (L.) infantum altera o perfil fenotípico das progênies celulares, modificando a expressão de marcadores de superfície das linhagens eritroide e mieloide nas células, após a diferenciação. Além disso, ao avaliar a expressão gênica de SIRT6, observamos que o gene que codifica esta proteína está aumentado nos momentos iniciais da infecção, sugerindo fortemente sua contribuição nos eventos de diferenciação celular e na expressão de TNF-α pelas células infectadas. Assim, com a realização deste trabalho foi possível concluir que a infecção por L. (L.) infantum é capaz de induzir alterações na hematopoese e no perfil fenotípico das progênies, interferindo no número de progênies derivadas da linhagem eritroide. Concluímos ainda que a expressão de citocinas e sirtuínas é importante na criação de um microambiente que, ao mesmo tempo, favorece a hematopoese e a manutenção da infecção.
Resumo em Inglês
Visceral Leishmaniasis (VL) is a letal zoonosis that affect thousands of people in Brazil. There are many factors that increase susceptibility to disease and immunosuppression is a well-established risk factor. Post-immunosuppression leishmaniasis are characterized by the increase of parasite burden, hematopoietic disorders and unusual clinical manifestations.
In the present study, we use a new approach infecting human bone marrow derived stem cells with L. (L.) infantum. Using this strategy, we demonstrated, by flow cytometry, that human hematopoietic stem cells (hHSC) are able to phagocytize L. (L.) infantum promastigotes and
release modulatory and pro-inflammatory cytokines, mainly TNF-α. Moreover, our results demonstrated that L. (L.) infantum infection enhances
in vitro hematopoiesis, favoring the development of erythrocytic lineage through an unknown mechanism, that seems to be related with SIRT1 expression. Furthermore, we found that in vitro hematopoiesis of
L. (L.) infantuminfected cells also alters phenotypic profile of their progenies,
modifying the expression of surface markers on both differentiated erythroid and myeloid lineages. Regarding the evaluation of SIRT6 expression, we observed that the gene that encode this protein is increased at early times of
L. (L.) infantum infection, suggesting strongly the role of this sirtuin in cell differentiation and TNF-α release. In conclusion, L. (L.) infantum
is capable to induce hematopoietic and phenotypic profile alterations, interfering in the number of erythroid colonies. Moreover, the cytokine and sirtuin expressions may play a pivotal role in creating a microenvironment that favor both hematopoiesis and infection maintenance.
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