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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/56149
FUNCTIONAL EGF DOMAIN OF THE HUMAN NEUREGULIN 1α PRODUCED IN ESCHERICHIA COLI WITH ACCURATE DISULFIDE BONDS
Author
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil. / Universidade Federal do Paraná. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil. / Universidade Federal do Paraná. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Mass Spectrometry Facility. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Plataforma de Biologia Estrutural Integrada. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil. / Universidade Federal do Paraná. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil. / Universidade Federal do Paraná. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Mass Spectrometry Facility. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Plataforma de Biologia Estrutural Integrada. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Biologia Estrutural e Engenharia de Proteínas. Curitiba, PR, Brasil. / Universidade Federal do Paraná. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Curitiba, PR, Brasil.
Abstract
Neuregulins comprise a large family of growth factors containing an epidermal growth factor (EGF) domain.NRG1 acts in signaling pathways involved in proliferation, apoptosis, migration, diferentiation, and adhesion of manynormal cell types and in human diseases. The EGF domain of NRG1 mediates signaling by interaction with members ofthe ErbB family of receptors. Easy access to correctly folded hNRG1α EGF domain can be a valuable tool to investigate its function in diferent cell types. The EGF domain of hNRG1α was produced in Escherichia coli in fusion with TrxA and purifedafter cleavage of TrxA. Conformation and stability analyses were performed by using biophysical methods and the disulfde bonds were mapped by mass spectrometry. The activity of the hNRG1α EGF domain was demonstrated in cell proliferation and migration assays. Approximately 3.3 mg of hNRG1α EGF domain were obtained starting from a 0.5 L of E. coli culture. Correct formation of the three disulfde bonds was demonstrated by mass spectrometry with high accuracy. Heat denaturation assays monitored by circular dichroism and dynamic light scattering revealed that it is a highly stable protein. The recombinant EGF domain of hNRG1α purifed in this work is highly active, inducing cell proliferation at concentration as low as 0.05 ng/mL. It induces also cell migration as demonstrated by a gap closure assay. The EGF domain of hNRG1α was produced in E. coli with the correct disulfde bonds and presented high stimulation of HeLa cell proliferation and NDFH cell migration.
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