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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58732
COMPARISON OF PHENOL-CHLOROFORM AND A COMMERCIAL DEOXYRIBONUCLEIC ACID EXTRACTION KIT FOR IDENTIFICATION OF BLOODMEAL SOURCES FROM TRIATOMINES (HEMIPTERA: REDUVIIDAE)
Gastrointestinal contents
RNA ribosomal 12S
Polymerase Chain Reaction
Autor(es)
Afiliação
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Natal, RN, Brasil/Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Biociências. Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas à Saúde da Mulher. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas.Natal, RN, Brasil/Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Biociências. Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Natal, RN, Brasil/Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Biociências. Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas à Saúde da Mulher. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas.Natal, RN, Brasil/Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Biociências. Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária. Natal, RN, Brasil.
Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Natal, RN, Brasil/Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Resumo em Inglês
Introduction: Knowledge of triatomine bloodmeal sources is essential for understanding vector-host interactions in Trypanosoma cruzi transmission cycles. Expensive commercial deoxyribonucleic acid (DNA) extraction kits are widely used for bloodmeal identification. This study assessed the performance of an inexpensive phenol-chloroform DNA extraction protocol for identification of triatomine bloodmeal sources, comparing it with a conunercially available kit. Methods: Both methods were used to obtain DNA from the intestinal contents of Triatoma brasiliensis blood-fed on either Columba sp., Alus musculus, or Gallus gallus. Subsequently, the mitochondria] 12S ribosomal ribonucleic acid (rRNA) gene was amplified by polymerase chain reaction, sequenced, and compared with GenBank data. Results: Twelve (80%) samples extracted with the commercial kit and four (26.7%) with phenol-chloroform were pure (according to the A260/A280 ratio). Samples extracted with phenol-chloroform, except for Columba sp. samples, had higher DNA concentration than those extracted with the commercial kit. Samples extracted using phenol-chloroform and blood-fed on G. gallus had significantly higher DNA concentration than those blood-fed on Columba sp. (p-value <0.001) and M musculus (p-value <0.001). The 215-base-pair 12S rRNA fragment was amplified from all samples and produced reliable sequences, enabling the identification of the bloodmeal source, most of which showed identity and coverage above 95%. The phenol-chloroform method was much less expensive than the commercial kit but took considerably more time to perform. Conclusions: Our data showed that both DNA extraction methods produced reliable sequences enabling identification of triatomine bloodmeal sources but differed greatly in cost and time required.
Palavras-chave em inglês
TriatominaeGastrointestinal contents
RNA ribosomal 12S
Polymerase Chain Reaction
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