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THE CONVENTIONAL DIAGNOSIS CHALLENGE: REAL-TIME PCR AND NESTED PCR CORRELATION WITH THE SCORING SYSTEM FOR INDIVIDUALS AT HIGH-RISK OF PNEUMOCYSTIS JIROVECII PNEUMONIA
Fluorescent antibody technique direct
Real-time polymerase chain reaction
Técnica de inmunofluorescencia directa
Reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa
Autor(es)
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Micologia. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Micologia. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Hospital São José de Doenças Infecciosas. Fortaleza, CE, Brazil / Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Saúde Comunitária. Fortaleza, CE, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Medicina Intensiva. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço de Anatomia Patológica. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço de Anatomia Patológica. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Micologia. Rio de Janeiro, RJ, Brazil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço Ambulatorial. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Micologia. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Hospital São José de Doenças Infecciosas. Fortaleza, CE, Brazil / Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Departamento de Saúde Comunitária. Fortaleza, CE, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Medicina Intensiva. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço de Anatomia Patológica. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço de Anatomia Patológica. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Micologia. Rio de Janeiro, RJ, Brazil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Serviço Ambulatorial. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.
Resumo em Inglês
Introduction: Pneumocystis jirovecii is an opportunistic fungus that affects mainly people living with HIV (CD4 cell count lower than 200 cells/ml) and other immunosuppressed patients. Since P. jirovecii does not grow on routine mycological media, diagnosis of P. jirovecii pneumonia relies on indirect evidence of its presence in respiratory samples. Objectives: To associate the results of direct immunofluorescence and two molecular methods with a score to predict P. jirovecii pneumonia in patients with AIDS. Materials and methods: A prospective study was conducted with 40 patients. A respiratory sample collected before treatment was subjected to direct immunofluorescence using the Merifluor kit, to nested PCR targeting the mitochondrial large subunit ribosomal RNA, and to the VIASURE real-time PCR kit. Results: These three techniques revealed P. jirovecii in 6, 12, and 15 samples, respectively. All positive samples by direct immunofluorescence were positive by nested PCR, and all positive samples by nested PCR amplified by real-time PCR. There was a statistically significant association between the P. jirovecii pneumonia score and the molecular methods. Two patients were early diagnosed and responded well to treatment. Conclusion: Molecular methods, especially real-time PCR, are recommended for early diagnosis of P. jirovecii pneumonia in AIDS patients.
Resumo em Espanhol
Introducción: Pneumocystis jirovecii es un hongo oportunista que afecta principalmente a personas con HIV (recuento de CD4 menor de 200 células/ml) y a otros pacientes inmunosuprimidos. Como P. jirovecii no crece en los medios micológicos de rutina, el diagnóstico de neumonía por P. jirovecii se basa en la evidencia presente en muestras respiratorias. Objetivos: Asociar los resultados de la inmunofluorescencia directa y los de dos métodos moleculares con un puntaje para predecir la neumonía causada por P. jirovecii en pacientes con sida. Materiales y métodos: Se realizó un estudio prospectivo de 40 pacientes. Se recolectó una muestra respiratoria antes del inicio de tratamiento y se sometió a una prueba de inmunofluorescencia directa con el kit Merifluor, una PCR anidada para la amplificación de la subunidad larga del ribosoma mitocondrial y una PCR en tiempo real usando el kit VIASURE. Resultados: Estas tres técnicas evidenciaron la presencia de P. jirovecii en 6, 12 y 15 muestras, respectivamente. Todas las muestras positivas por inmunofluorescencia directa fueron positivas en la PCR anidada y todas las muestras positivas en la PCR anidada amplificaron por PCR en tiempo real. Se encontró una asociación estadística entre los valores de la neumonía causada por P. jirovecii y los métodos moleculares. Dos pacientes con diagnóstico temprano respondieron satisfactoriamente al tratamiento. Conclusión. Se recomiendan los métodos moleculares, especialmente la PCR en tiempo real, para el diagnóstico temprano de neumonía causada por P. jirovecii en pacientes con sida.
reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa.
Palavras-chave em inglês
Pneumonia pneumocystisFluorescent antibody technique direct
Real-time polymerase chain reaction
Palavras-chave em espanhol
Neumonía por PneumocystisTécnica de inmunofluorescencia directa
Reacción en cadena en tiempo real de la polimerasa
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