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Title: Avaliação da atividade leishmanicida da combinação de curcumina e DETC
Advisor: Santos, André Vannier dos Santos
Members of the board: Cunha, Antonio Ricardo Khouri
Bezerra, Daniel Pereira
Santos, Marcos André Vannier dos
Authors: Silva, Jacqueline de Jesus
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Abstract: A leishmaniose é uma doença tropical, negligenciada, causada por protozoários do gênero Leishmania sp. Diferentes espécies de Leishmania causam manifestações clínicas variadas, desde infecções auto-limitadas até aquelas que levam envolvimento visceral. A OMS estima que 350 milhões de pessoas vivem atualmente em área de risco para contrair alguma das diferentes formas desta doença de impacto global. Mundialmente ocorrem cerca de 2 milhões de novos casos, das diferentes formas clínicas, por ano. Os medicamentos para o tratamento da leishmaniose estão frequentemente associados a casos de resistência e graves efeitos colaterais. Assim, a busca de novas drogas é uma demanda premente. A curcumina, um composto natural demonstra atividade in vitro contra cepas de L. amazonensis. O dietilditiocarbamado de sódio (DETC), um antagonista de sistema antioxidante, aumenta a morte do parasito por macrófagos in vitro e é eficaz contra a leishmaniose em modelo murino. A utilização de combinações sinérgicas é estratégia farmacológica valiosa, uma vez que permite a utilização de dosagens mais baixas, reduzindo assim os efeitos colaterais e a possibilidade de seleção de parasitos resistentes. No presente trabalho, investigamos o efeito da combinação de curcumina e DETC contra L. amazonensis in vitro. A combinação de curcumina e DETC na proporção de 10:1, apresentaram valores de IC50 de 3.25 μM e 0,32 μM respectivamente. Análise em isobolograma indica efeito sinérgico quando a combinação atinge 25% e 50% de inibição. Os valores de CC50 para a combinação sobre células de mamíferos foram 23,51 μM e 2,35 μM para a curcumina e DETC, respectivamente. O índice de seletividade da combinação foi 7,23. A curcumina, DECT e sua combinação aumentaram a peroxidação lipídica em 1,42 e 1,94 e 2,75 vezes, respectivamente. As substâncias isoladas e a combinação não causaram a morte das células após 72h de tratamento com a IC50. Para inibição de 75%, as substâncias isoladas permaneceram citostáticas, enquanto a combinação foi citotóxica. As células foram lavadas após 24h para remover as substâncias e apenas de DETC manteve o efeito inibitório. Curcumina e combinação desencadearam marcação positiva para vacúolos autofágicos após 72h de tratamento. Quando avaliadas por microscopia eletrônica de transmissão, de modo geral, as células mostraram alterações mitocondriais e evidências de autofagia após os tratamentos. Finalmente, é possível considerar a combinação de curcumina e DETC como uma possível alternativa terapêutica para o tratamento da leishmaniose. No entanto, mais experimentos devem ser realizados para melhor determinar o mecanismo de ação e avaliação da atividade in vivo da combinação.
Abstract: Leishmaniasis is a neglected tropical disease caused by protozoa of the genus Leishmania sp. Different species of Leishmania cause varied clinical manifestations, ranging from simple self-healing to visceral infections. WHO estimates 350 million people live at risk of developing any of the many forms of the disease which has high global impact. There are about 2 million new cases with different clinical forms per year worldwide. The drugs to treat leishmaniasis are often associated with refractory cases and serious side effects. Thus, the search for new drugs is a pressing demand. Curcumin, a natural compound demonstrates in vitro activity against strains of L. amazonensis. Diethyldithiocarbamate (DETC), an antagonist of antioxidant system, increases death of the parasite by macrophages in vitro and is effective against leishmaniasis in murine model. The use of synergistic combinations is valuable pharmacological strategy, since it allows the use of lower dosages, reducing side effects and diminishes the possibility of resistant parasite selection. In the present work, we investigated the effect of combination of curcumin and DETC against L. amazonensis in vitro. The combination 10:1 of curcumin and DETC presented IC50 values of 3.25 μM and 0.32 μM respectively. Isobolographic analysis of data indicates that there is synergistic effect only when the combination reaches 25% and 50% of inhibition. The IC50 values for the combination upon mammals cells was 23.51 μM and 2.35 μM for curcumin and DETC respectively. The combination selective index was 7.23. Curcumin, DECT and the combination increased the lipid peroxidation 1.42 and 1.94 and 2.75 fold, respectively. The individual substances and the combination did not cause cell death after 72hr at IC50. At inhibition 75%, isolated substances remained cytostatic, however, the combination was cytotoxic. The removal of three compounds after 24hr do not reverted only DETC effects. Curcumin and combination resulted positive staining for autophagic vacuoles after 72hr of treatment. When assessed by transmission electron microscopy, in general, the cells showed mitochondrial alterations and features of autophagy evidence after treatments. Finally, it is possible to consider the combination of curcumin and DETC as a possible therapeutic alternative for the treatment of leishmaniasis. However, further experiments must be carried out to better determine the mechanism of action and the in vivo activity of the combination
Keywords: Curcumin
DETC
Oxidative Stress
Drug Combination
keywords: Curcumina
DETC
Estresse oxidativo
Combinação de fármacos
DeCS: Curcumina
Estresse oxidativo
Fármacos
Issue Date: 2016
Publisher: Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Citation: SILVA, J. de J. Avaliação da atividade leishmanicida da combinação de curcumina e DETC. 2016. 87 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Universidade Federal da Bahia. Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2016.
Date of defense: 2016-03-14
Place of defense: Salvador/Ba
Department: Coordenação de Ensino
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Program: Pós-Graduação em Patologia
Copyright: closed access
Appears in Collections:BA - IGM - Dissertações de Mestrado dos Profissionais

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