Análise de alvos moleculares quanto ao potencial de uso como \201CDNA Barcode\201D para identificação de espécies de Leishmania

Abstract

O gênero Leishmania foi descrito pela primeira vez em 1903 e a partir daí um grande número de espécies foi descrito. Embora os esquemas taxonômicos tem utilizado cada vez mais características intrínsecas para identificar as espécies de Leishmania, estes ainda tem como base as classificações baseadas em características extrínsecas. Muitas espécies forma descritas considerando as características epidemiológicas, ecológicas e biológicas. O atual sistema de classificação propõe a descrição de mais de 30 espécies e tem como base os resultados das análises de isoenzimas "multilocus enzyme electrophoresis", MLEE), técnica essa que ainda é considerada como padrão ouro para identificação de espécies de Leishmania. Alguns estudos empregando um único locus para identificação de Leshmania sugerem a revisão da taxonomia deste gênero. Em um sentido amplo, a análise por um único locus tem sido descrita como análise de código de barras, embora estudos de código de barras "tradicionais" empreguem normalmente o gene mitocondrial citocromo oxidase I - COI. Em todos os estudos de código de barras (sentido amplo), a identificação das espécies Leishmania considera os resultados de MLEE para fins de comparação e nem um destes estudos demonstra total concordância entre as análises de sequência de DNA e os resultados de MLEE, além de algumas discordâncias terem sido detectados entre diferentes análises de DNA No presente estudo analisamos sequências disponíveis no GenBank correspondentes a 19 alvos. Além disso, produzimos 161 sequências para o gene hsp70, totalizando 317 sequências correspondendo a 29 espécies de Leishmania e ainda 255 sequências correspondentes a um fragmento de aproximadamente 500pb de COI, para representantes de 27 espécies. Diferentes níveis de identificação foram obtidos pelos diversos alvos empregados, mas para a maioria das análises os resultados foram comprometidos pelas amostras disponíveis, que não representam todas as espécies, além de limitação devido ao número de isolados por espécie. Este estudo foi suplantado por hsp70 e COI. Alguns autores argumentam que a hsp70 é um bom marcador que pode superar as limitações de MLEE e promover uma boa revisão taxonômica. Os resultados das análises das sequências de hsp70 de muitas espécies de Leishmania e diferentes isolados, por método baseado em distância entre as sequências e agrupamento por NeighborJoining (NJ), indicam algum nível de definição de espécies, mas em alguns casos a delimitação de espécies não foi evidente. Os resultados obtidos com COI indicam uma melhor delimitação de espécies quando comparado com a classificação atual baseada em MLEE O melhor nível de identificação foi visto combinando NJ, com análise de "barcode gaps" que identifica a lacuna entre a distancia intraespecífica e interespecífica e também baseada em caracteres. Algumas espécies descritas não puderam ser identificadas pelo COI e para esses casos sugerimos a complementação com outros alvos. De um modo geral, os resultados apontam para a necessidade de revisão taxonomia de gênero Leishmania, com uma melhor definição das espécies deste grupo de parasitas. No entanto, destacamos o aspecto que os resultados com base em um único locus são apropriados para identificação de espécies, mas não é capaz de promover esta revisão, solicitando uma abordagem de taxonomia integrativa.