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2024-01-01
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ISOLATION, STRUCTURAL AND FUNCTIONAL CHARACTERIZATION OF A NEW LYS49 PHOSPHOLIPASE A2 HOMOLOGUE FROM BOTHROPS NEUWIEDI URUTU WITH BACTERICIDAL POTENTIAL.
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Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Rondônia. Porto Velho, RO, Brasil. / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil.
Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.
Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa em Medicina Tropical de Rondônia. Porto Velho, RO, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Regional Amazonica IKIAM. Tena, Napo, Ecuador.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil. / Faculdade São Lucas. Porto Velho, RO, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil
Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil.
Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Celular Aplicada à Saúde. Porto Velho, RO, Brasil.
Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa em Medicina Tropical de Rondônia. Porto Velho, RO, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Departamento de Bioquímica. Campinas, SP, Brasil.
Universidade Regional Amazonica IKIAM. Tena, Napo, Ecuador.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil. / Faculdade São Lucas. Porto Velho, RO, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil / Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Rede BIONORTE. Brasil.
Abstract
Snake venom is a complex mixture of active compounds consisting of 80 e 90% proteins and peptides that
exhibit a variety of biological actions that are not completely clarified or identified. Of these, phospholipase
A2 is one of the molecules that has shown great biotechnological potential. The objectives of this study were to isolate, biochemically and biologically characterize a Lys49 phospholipase A2 homologue from the venom of Bothrops neuwiedi urutu. The protein was purified after two chromatographic steps, anion exchange and reverse phase. The purity and relative molecular mass were assessed by SDS-PAGE, observing a molecular weight typical of PLA2s, subsequently confirmed by mass spectrometry obtaining a mass of 13,733 Da. As for phospholipase activity, the PLA2 proved to be enzymatically inactive. The analyses by Edman degradation and sequencing of the peptide fragments allowed for the identification of 108 amino acid residues; this sequence showed high identity with other phospholipases A2 from Bothrops snake venoms, and identified this molecule as a novel PLA2 isoform from B. neuwiedi urutu venom, called BnuTX-I. In murine models, both BnuTX-I as well as the venom induced edema and myotoxic responses. The cytotoxic effect of BnuTX-I in murine macrophages was observed at concentrations above 12 mg/mL. BnuTX-I also presented antimicrobial activity against gram-positive and negative bacterial strains, having the greatest inhibitory effect on Pseudomonas aeruginosa. The results allowed for the identification of a new myotoxin isoform with PLA2 structure with promising biotechnological applications.
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