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AVALIAÇÃO DO PAPEL DA IL-15 E DA IL-12 NA IMUNORREGULAÇÃO DA LEISHMANIOSE HUMANA
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Abstract in Portuguese
A resistencia contra a infecção pela leishmânia é mediada pela resposta imune celular caracterizada por ativação macrofágica e produção de citocinas como IL-2, IL-12 e IFN-y. Na leishmaniose visceral americana (L V A) ocorre ausencia de resposta imune celular específica que pode ser mediada por substâncias séricas solúveis. A leishmaniose tegumentar inclui um amplo espectro de doenças que variam da forma não responsiva leishmaniose cutânea difusa (DCL), a hiperresponsiva leishmaniose cutânea mucosa (LCM). A IL-15 é uma citocina que tem atividades biológicas semelhantes a IL-2 incluindo estimulação da proliferação de células T e células NK ativadas O objetivo deste estudo foi determinar o papel de IL-15 na resposta imune da leishmaniose humana e o potencial sinergismo com IL-12. Nós estudamos CMSP de 19 pacientes com L VA, 19 com LCM e 3 com LCD, após cultivo por 5 dias na presença de antígeno de leishmânia, IL-15 e/ou IL-12 nos pacientes com L V A e com LCD ou de anticorpos monoclonais anti¬IL-12 ou anti- IL-15 nos pacientes com LCM. Linfoproliferação, dosagem de IFN-y por ELISA e resposta citotóxica contra células tumorais foram os parâmetros utilizados na avaliação Investigamos também se IL-12 p40 tem um papel como imunossupressor sérico na leishamniose. Através de ELISA nós comparamos a concentração sérica de IL-12 p40 em 15 pacientes com L V A, incluindo 9 após tratamento, 10 pacientes com L T A e 15 controles negativos CMSP de pacientes com L V A, assim como dos controles normais, apresentaram resposta proliferativa dose-dependente a IL-15 tanto com meio quanto com antígeno de leishmânia. IL-15 não aumentou a produção de IFN-y em pacientes com LV A ou com LCD como também não apresentou sinergismo com a IL-12. Da mesma forma a IL-15 foi capaz de induzir aumento da citoxicidade e esta indução foi maior que a IL-12. Como já havia sido previamente demonstrado, CMSP de pacientes com LCM mostraram uma exacerbação da citotoxicidade após estimulação com antígeno de leishmânia. Esta resposta foi heterogenea e não foi negativamente regulada pela neutralização de IL-12 ou de IL-15 A linfoproliferação por CMSP de pacientes com LCM também não foram revertidas com antícorpos anti-IL-12 e/ou anti-IL-15 Anti-IL-12, mas não anti-ILl5 diminuiu a produção de IFN-y .Comparando a média da concentração de IL-12 p40 de pacientes com L V A, L T A e controles normais os resultados foram 283, 109 and 89 pglml respectivamente e os elevados níveis dos pacientes com L V A reduziram após o tratamento da doença (p=0.007) Nossos resultados sugerem que IL-15 não é importante na resposta imune da leishmaniose humana por ser um mediador inespecífico de citotoxicidade e de linfoproliferação e não induzir produção de IFN-y na L V A A resposta imune exacebada na LCM não é revertida pela neutralização in vitro de IL-12 e/ou IL-15. IL-12 p40 é potencialmente um imunossupressor na LVA.
Abstract
The resistance to leishmania infection is mediated by cellular immune response characterized by macrophage activation and production of cytokines like IL-2, IL-12 and IFN-y. American visceral leishmaniasis (AVL) is characterized by absense of cellular immune response that can be mediated by soluble serum molecules. Tegumentary leishmaniasis includes a spectrum of diseases that varies from the unresponsive difuse cutaneous leishmaniasis (DCL), to mucocutaneous leishmaniasis (MCL), the hiperresponsive pole. IL-15 is a cytokine that has biological activities similar to IL-2 including grow stimulation of activated T and NK cells. The aim of this study was to determine the role of IL-15 in the immune response of human leishmaniasis and its potential synergism with IL-12. We studied PBMC of 19 AVL, 19 MCL and 3 DCL patients. After a five day culture in the presence of leishmanial antigens, cytokines (IL-12 and IL-15) or mAbs a-IL-l2 or a-IL-15 we evaluated lymphoproliferation, IFN-y production by ELISA and citotoxity against tumoral cells. We also invetigated if IL-12 p40 plays a role as serum supressor agent in human leishmaniasis. Using ELISA, we compared the plasmatic concentration of IL-12 p40 in 15 patients with AVL, including 9 after treatment, 10 patients with ATL and 15 controls. PBMC of AVL patients, as well as those from normal controls, showed a dose-response mitogenic response to IL-15. IL-15 did not augment IFN-y production in AVL or DCL patients nor sinergized with IL-12. In the same manner, IL-15 and in a less extend, IL-12, induced an increase in NK cell citoxicity. As was previously demonstrated, PBMC of MCL patients showed a high citotocity response after stimulation with leishmania antigen. This response was heterogeneous and was not negatively regulated by neutralization of IL-12 or IL-15. Lymphoproferation and IFN-y production were not abrogated by a-IL-12 or a-IL-15. Comparing the median of IL-12 p40 concentrations of AVL, ATL and controls the results were 283, 109 and 89 pg/ml respectively and the higher levels of AVL patients reduced after treatment (p=0,007). Taken together these results suggest that IL-15 is not a important molecule in the immune response of leishmaniasis since it mediates citotocity and lymproiiferation in a unspecific manner and does not induce IFN-y production in AVL. The exarcebated immune response in MCL is probably mediated by a great number of stimulus and the blockage of IL-12 and/or IL-15 can not reverse it. IL-12 p40 is a suitable immunosuppressor in human leishmaniasis.
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