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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34273
INIBIÇÃO DA REPLICAÇÃO DO HIV-1 PELO ALCALÓIDE INDÓLICO CORONARIDINA E O SEU ANÁLOGO 18-METOXI-CORONARIDINA
Silva, Edinete Melo da | Date Issued:
2002
Author
Advisor
Affilliation
Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.
Abstract in Portuguese
Os alcalóides são utilizados como analgésicos, estimulantes do sistema nervoso central, e no tratamento de algumas enfermidades, como a malária e o câncer. Experimentalmente, os alcalóides exercem potentes efeitos farmacológicos sobre uma ampla variedade de patógenos, inclusive o HIV-l. A 18-metoxi-coronaridina (18M-COR), análogo sintético do alcalóide indólico de origem vegetal Coronaridina (COR), apresenta atividade leishmanicida, in vitro, e anti-dependência química, in vivo. Investigar se COR e 18M-COR inibem a replicação do HIV-l em células mononucleares do sangue periférico (PBMC)e macrófagos humanos. PBMC de doadores normais foram infectados com isolados primários de HIV-1, com diferentes tropismos para receptores de quimiocinas (R5, R5X4 e X4), e expostos a diferentes concentrações de COR ou de 18M-COR. A replicação viral foi avaliada após sete dias pela medida da atividade da transcriptase reversa ou da quantificação do antígeno p24, nos sobrenadantes de cultura. Macrófagos derivados de monócitos foram infectados por um isolado monocitotrópico de HIV-1 e expostos a 18M-COR, durante 21 dias. A replicação do HIV-1 foi avaliada a cada 7 dias, como citado acima. A viabilidade celular dos PBMC e macrófagos expostos aos alcalóides foi avaliada pelos ensaios de exclusão do corante azul de Trypan e pelo XTT. Verificamos que COR e IBM-COR exercem efeito inibitório dose-dependente sobre a replicação do HIV-1, independentemente do seu tropismo celular, em concentrações que não alteram a viabilidade das células-alvo. A 18M-COR (50IlM) inibe a replicação viral, em PBMC, atingindo até 70±8%, 75±3% e 72±6% de inibição do crescimento dos vírus R5, R5X4 e X4, respectivamente. Resultados semelhantes foram observados sobre o crescimento do HIV-1 em macrófagos: após 14 dias de cultura, encontramos entre 49% e 61% de inibição, e entre 66% e 83% após 21 dias, para as concentrações 12,51lM e 251lM, respectivamente. Em PBMC, o efeito inibitório da 18M-COR é ligeiramente inferior ao exercido pelo anti-retroviral AZT e, em macrófagos, os efeitos são similares. Dados preliminares sugerem que a 18M-COR inibe a replicação viral através da inibição da enzima transcriptase reversa do HIV-1. A 18M-COR inibe a replicação de isolados primários de HIV-l em PBMC e em macrófagos, independentemente do uso preferencial de correceptores pelos isolados testados; esta atividade anti-retroviral é provavelmente mediada através da inibição da enzima viral transcriptase reversa.
Abstract
Alkaloids have been used as analgesics, stimulants of the central nervous system and for the treatment of some disorders, such as malaria and cancer. It has been shown in in vitro studies that alkaloids are endowed with potent inhibitory activities against a variety of pathogens, including HIV-1. The 18-methoxi-coronaridine (18M-C0R), a synthetic analogue of the natural indole alkaloid coronaridine (COR), shows an in vitro leishmanicidal and an in vivo anti-addiction properties. [OBJECTIVE] To investigate whether COR and 18M-C0R inhibit the HIV-1 replication in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and monocyte-derived macrophages. (MATERIAL AND METHODS] PBMC from normal donors were infected by HIV-1 primary isolates presenting distinct tropisms for chemokine receptors (R5-, X4- and R5X4-tropic viruses), and exposed to different concentrations of COR or 18M-C0R. Viral replication was evaluated after seven days by measuring the activity of the enzyme reverse transcriptase or the p24 antigen concentration in culture supernatants. Macrophages were also infected by a monocytotropic isolate of HIV-1 and treated with 18M-C0R as well, and the viral replication was evaluated each seven days, as described above. The viability of the cells exposed to the alkaloids was monitored by the Trypan Blue exclusion test and by the XTT assay [RESULTS] We found that COR and 18M-C0R inhibit the HIV-1 replication in a dose-dependent manner, regardless of the isolate cell tropism, at non cell-toxic concentrations. The inhibitory activity of 18M-C0R (50 uM) in PBMC was up to 70 ± 8%, 75 ± 3% and 72 ± 6% for R5, R5X4 and X4 isolates, respectively. Similar results were observed for HIV-1 replication in macrophages: we found 49% to 61% of inhibition after 14 days of infection, and 66% to 83% after 21 days, at 12.5 |n,M and 25 |iM of 18M-C0R, respectively. In PBMC, the inhibitory activity of 18M- COR was only slightly smaller than that mediated by AZT, but it was similar in macrophages. Preliminary results suggest the 18M-C0R antiretroviral activity is mediated through inhibition of the HIV-1 enzyme reverse transcriptase [CONCLUSIONS] 18M-C0R inhibits the infection mediated by primary isolates of HIV-1 in PBMC and macrophages, independently of the viral correceptor usage; this anti-HIV-1 activity is probably mediated through inhibition of the enzyme reverse transcriptase.
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