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A PARTICIPAÇÃO DE P40 NA INFECÇÃO DE CAMUNDONGOS C57BL
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Abstract in Portuguese
Leishmania braziliensis é o principal agente etiológico da leishmaniose cutânea no Brasil. Fatores e mecanismos envolvidos com resistência ou susceptibilidade à infecção por esta espécie de Leishmania foram pouco estudados. Neste trabalho, avaliou-se a participação de p40 no curso da infecção de camundongos C57BL/6, utilizando-se camundongos knocked out para esta molécula, C57BL/6p40-/-, deficientes, portanto, na produção de 1L-12 e 1L-23. Partiu-se da hipótese de que a ausência de p40 toma camundongos C57BL/6 susceptíveis à infecção. Procedeu-se a injeção de L. braziliensis (105 parasitos) nas orelhas de camundongos C57BL/6 e C57BL/6p40-/-, e o acompanhamento do curso da infecção a partir de 6 horas até 10 semanas pós-infecção. Monitorou-se o desenvolvimento das lesões, a carga parasitária e a ocorrência de disseminação de parasitos para baço e fígado. Caracterizou-se a resposta inflamatória por meio da análise histopatológica em cortes de orelhas, linfonodos, baços e fígados, corados com H&E. Após dez semanas de infecção, camundongos C57BL/6 controlaram a carga parasitária nas lesões, mas os parasitos persistiram nos linfonodos, sem disseminação para baço ou fígado. Por outro lado, camundongos C57BL/6p40-/- foram incapazes de conter a infecção, e desenvolveram lesões progressivas e doença visceral. Nas fases iniciais da infecção, a reposta inflamatória na pele foi distinta nos dois grupos, sendo menos intensa com menor recrutamento de neutrófilos nos camundongos C57BLl6p40-1-. Com uma semana de infecção, camundongos C57BLl6 apresentaram um infiltrado inflamatório misto, composto por macrófagos, linfócitos e neutrófilos, enquanto que nos camundongos C57BLl6p40-1- o infiltrado foi predominantemente macrofágico. Cinco semanas após a infecção, ambos os grupos apresentaram um infiltrado inflamatório difuso do tipo misto, com parasitismo mais intenso nos camundongos C57BL/6p40-/-. Dez semanas após infecção, não foram detectados parasitos nas lesões, mas o infiltrado inflamatório persistiu. Nos camundongos C57BLl/p40-/-, a inflamação foi intensa com infiltrado do tipo misto com macrófagos intensamente parasitados. No linfonodo de drenagem, camundongos C57BL/6 desenvolveram resposta inflamatória granulomatosa associada à persistência dos parasitos. Nos camundongos C57BL/6p40-/- a carga parasitária aumentou progressivamente, acompanhada pela alteração da arquitetura do linfonodo e ausência de granulomas. Nestes animais, cinco semanas após infecção foi observado no baço e no fígado infiltrado inflamatório com macrófagos parasitados. Estes resultados confirmam a participação de p40 no controle da infecção por L. braziliensis e sugerem que sua ausência determina alterações na dinâmica e composição da resposta inflamatória, determinantes no curso da infecção em camundongos C57BL/6.
Abstract
Leishmania braziliensis is the main agent of coetaneous leishmaniasis in Brazil. Factors and mechanisms involved in resistance and susceptibility to the infection with this species of Leishmania have not been well studied. In this work we evaluated the role of p40 in the course of the infection of C57BL/6 mice with L. braziliensis. Knock-out (KO) mice for p40 (C57BL/6p40’^’), which do not produce IL-12 or IL~23 were used. The absence of p40 causes C57BL/6 mice susceptible to L. braziliensis infection. Mice were infected in the dermis of the ear with L. braziliensis (10^ parasites). Course of the infection was monitored regarding development of lesions, parasitic load and dissemination of the parasites to the spleen and liver at different time points after infection. Histological analysis of inflammatory response in the skin lesions, draining lymph nodes, spleen and liver was performed at 1, 5 and 10 weeks after infection. Moreover, early skin inflammatory response vs^as evaluated 6, 12 and 24 hours after infection. Both groups of mice developed skin lesions and parasites were found in the draining lymph nodes. After 10 weeks of infection wild mice were able to control parasites in the site of inoculation but not in the draining lymph node. They did not have dissemination of infection to the spleen or liver. On the other hand, KO mice were unable to control infection and had progressive lesions with dissemination of parasites to internal organs. The inflammatory response in the skin was distinct in wild as compared to KO mice. In the early phase of the infection, KO mice had milder inflammatory response with fewer neutrophils than wild mice. At 1 week after infection, KO mice showed milder infiltrate, predominantly macrophagic, whereas wild mice showed a mixed infiltrate constituted by macrophages, lymphocytes and neutrophils. At 5 weeks after infection, both group of mice had a dense, diffuse, and mixed inflammatory infiltrate with parashized macrophages. Parasitism was more intense in KO mice. At the 10^*^ week after infection, inflammation persisted in wild mice but parasites were not present. At this same time point, KO mice showed dense mixed inflammatory infiltrate with huge amounts of parasites in the cytoplasm of macrophages. Interestingly, draining lymph nodes in wild mice showed persistent parasitism associated with the development of granulomatous inflammatory response. Increasing amounts of parasites were also present in lymph nodes of KO mice associated with progressive alteration of lymph node architecture and no granulomas were seen. After the 5^’’ week of infection, parasites were found in the spleen and liver of KO mice, associated with inflammatory infiltrate of macrophages. The results presented herein, clearly confirm the importance of p40 in the control of L. braziliensis infection and suggest that its absence detemiine alterations in the dynamics and composition of the inflammatory infiltrate that are important to the containment of the parasites in C57BL/6 mice.
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