Desenvolvimento de sistemas baseados em amplificação isotérmica em alça (LAMP) para o diagnóstico da doença de Chagas

Abstract

A doença de Chagas representa um importante problema de saúde pública, principalmente na América Latina. O diagnóstico precoce durante a fase aguda é crucial, pois permite o tratamento imediato, podendo interferir no prognóstico. A técnica de amplificação isotérmica em alça (LAMP) vem demonstrando potencial, por ser sensível, específica, de fácil execução e baixo custo. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver sistemas baseados em LAMP para o diagnóstico da doença de Chagas. Inicialmente foram avaliados dois sistemas descritos na literatura: Thekisoe et al. e Ordóñez et al. O sistema de Ordóñez et al. demonstrou elevada sensibilidade e especificidade, sendo utilizado como sistema de LAMP convencional e para o desenvolvimento de um sistema de LAMP em tempo real. O sistema de LAMP convencional foi aplicado em amostras de 77 indivíduos expostos ao surto agudo ocorrido em Ibimirim/PE e comparado ao diagnóstico parasitológico, sorológico e ao sistema de qPCR (TcSAT-IAM). Segundo critérios da Secretaria Estadual de Saúde de Pernambuco, 28 casos foram confirmados pelo critério laboratorial e 10 pelo clínico-epidemiológico. Considerando o critério laboratorial, a sensibilidade e especificidade do sistema de LAMP foi de 39,29% e 83,67%, respectivamente. Considerando o diagnóstico pelo sistema TcSAT-IAM, o sistema de LAMP apresentou sensibilidade de 60,87%, especificidade de 90,74%, acurácia de 81,82% e concordância considerada moderada. A coleta das amostras após o início do tratamento e o tempo de armazenamento representaram importantes limitações do estudo. Estes resultados demonstram a importância da coleta e armazenamento adequados das amostras e sugerem um “padrão-ouro composto”, considerando os testes preconizados em conjunto com técnicas moleculares, sendo a técnica de LAMP mais acessível para áreas de recursos limitados. Para facilitar a implementação na rotina laboratorial, foi desenvolvido um kit baseado em LAMP para o diagnóstico da doença de Chagas aguda .