Avaliação da resposta imune efetora e de memória de pacientes infectados ou com histórico de infecção por DENV e ZIKV

Abstract

Epidemias ocasionadas pelo ZIKV em regiões endêmicas de DENV favoreceram a ocorrência de coinfecções. Como objetivo inicial deste estudo, buscamos comparar o status de ativação de linfócitos T de pacientes mono ou coinfectados por DENV e/ou ZIKV. Para isso, utilizamos pacientes agudos monoinfectados por DENV (n=6) ou ZIKV (n=4), e coinfectados por DENV/ZIKV (n=7). O método de citometria de fluxo foi utilizado para avaliar a expressão de CCR5, CX3CR1 e CCR3 e a produção intracelular de IFN- , TNF- e IL-2. As células produtoras de IFN- foram detectadas pelo ELISPOT após estimulação in vitro com proteína NS1 DENV (1 a 4). Como resultados, observamos aumento nas frequências de linfócitos T CD4+ e CD8+ expressando CCR5, CX3CR1 e CCR3 nos três grupos de pacientes, sugerindo semelhanças nos padrões migratórios e funcionais dos linfócitos T nas mono- e coinfecções. Ainda, observamos menor capacidade de produção de citocinas pró-inflamatórias por linfócitos T CD4+ na coinfecção comparado às monoinfecções. Por fim, detectamos menor magnitude de resposta ao NS1 do DENV nos pacientes agudos mono- ou coinfectados comparados aos doadores saudáveis exposto a dengue, sugerindo um perfil transitório de imunossupressão na fase aguda das infecções. Na segunda parte, buscamos avaliar a resposta de memória imunológica de linfócitos T de mulheres (n=5), mães infectadas na gravidez (n=21) e filhos expostos ao ZIKV pela via transplacentária (n=18). Mães e crianças foram subdivididas com base no desfecho clínico da criança. Para isso, foram utilizadas metodologias de citometria de fluxo e ELISPOT para avaliação de linfócitos T estimuladas in vitro com peptídeos do ZIKV. Como resultado, observamos alta frequência de linfócitos T CD127lowTbetnegGATA-3+ nas mães e crianças, sugerindo que essas células estariam contribuindo para o desenvolvimento da resposta humoral nesses indivíduos. Ainda, alta frequência de linfócitos T CD4+ expressando CD107a e IFN- em todos os indivíduos, indicando que os linfócitos T CD4+ mantém um perfil de memória de longa duração, enquanto que nos linfócitos T CD8+ observamos um perfil de memória de curta duração. Ainda, demonstramos que os linfócitos T CD4+ TEMRA são os principais produtores de IFN-. Como última parte deste estudo, devido à alta similaridade entre ZIKV e DENV, a confirmação do diagnóstico utilizando os kits comerciais existentes é um desafio. Desta forma, buscamos predizer epítopos lineares das proteínas E, NS1 e NS5 do ZIKV para linfócitos B e avaliar sua capacidade de ligação ao IgG total de doadores com histórico de infecção por ZIKV ou DENV e pacientes infectados pelo DENV. Para isso, utilizamos mães com histórico de ZIKV (n=20) e pacientes com dengue ou com histórico de dengue (n=18). A predição e a avaliação do grau de conservação dos peptídeos lineares foi realizada utilizando os programas de predição BepiPred e EMINI. Detecção da capacidade de ligação dos peptídeos às IgG séricas foi feita por ELISA. Como resultado, dos 22 peptídeos preditos, 5 apresentaram grau de conservação <50%, os quais foram sintetizados. A detecção desses peptídeos por IgG séricas destes pacientes indicou que apenas o peptídeo NS18- 15 foi significativamente capaz de diferenciar os doadores imunes ao ZIKV dos ao DENV. Destacamos como contribuições desse estudo envolvem as demonstrações de que a resposta imunológica mediada por linfócitos T CD4+ na coinfecção por DENV e ZIKV apresentou a capacidade de menor produção de citocinas proinflamatórias quando comparados às monoinfecções; geração de linfócitos T CD4+ de memória de longa duração após a infecção pelo ZIKV, mas aparentemente linfócitos T CD8+ de curta duração; e de que o peptídeo NS18-15 do ZIKV seria um candidato potencial para ensaios diagnósticos futuros