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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58609
AVALIAÇÃO DA TÉCNICA DE DOSAGEM DE ATP POR BIOLUMINESCÊNCIA PARA A DETERMINAÇÃO DA VIABILIDADE DO BCG EM AMOSTRAS DE VACINA LIOFILIZADA
Liofilização
Adenosina Trifosfatases
Farmacologia
Técnicas de Transferência de Energia por Ressonância de Bioluminescência
Liofilização
Adenosina Trifosfatases
Farmacologia
Técnicas de Transferência de Energia por Ressonância de Bioluminescência
França, Dener Oliveira Lima e | Date Issued:
2022
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A tuberculose é causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis e figura como a principal doença bacteriana transmissível. Aproximadamente dois bilhões de pessoas, no mundo, estão infectadas com tuberculose latente não apresentando sintomas. Estima-se que anualmente 10 milhões de pessoas desenvolvam tuberculose ativa e 1,5 milhões evoluam para óbito. As medidas preventivas incluem o rastreamento de grupos de risco, detecção e tratamento dos casos e imunização com vacina bacilo Calmette-Guérin (BCG). A vacina BCG é preparada com cepas atenuadas de Mycobacterium bovis e submetida a testes de controle da qualidade que incluem a determinação da viabilidade dos bacilos mediante contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). Para tal, é necessária incubação de cerca de quatro semanas para que seja possível observar o crescimento das colônias bacterianas. Por isso, torna-se imperativa a utilização de métodos alternativos, como o ensaio de dosagem de ATP, para tornar o processo mais rápido. Assim, propôs-se um estudo para avaliar se o método de dosagem de ATP por bioluminescência pode ser utilizado para estimar a viabilidade do BCG em amostras de vacina liofilizada. A concentração de ATP foi determinada por medição da bioluminescência na presença de luciferina/luciferase. Inicialmente, definiu-se detalhes importantes para modificação do protocolo da Organização Mundial da Saúde, tais como o uso de tampão Tris-EDTA (TE) para extração do ATP e o volume de solução de reação adequado para os ensaios. Em seguida avaliou-se a linearidade, os limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ), e a precisão do método. Por fim, correlacionou-se a dosagem de ATP com a técnica de contagem de UFC. Demonstrou-se que a extração de ATP da vacina BCG utilizando tampão TE aquecido apresentou rendimento superior em relação a utilização, apenas, da solução de detecção do kit. Além disso, observou-se que não houve diferença estatisticamente significativa entre a quantidade de ATP detectada utilizando diferentes volumes da solução de detecção. O método de dosagem de ATP da vacina BCG apresentou boa correlação linear para o padrão de ATP (R2 = 0,999), para amostras de vacina BCG (viabilidade) (R2 = 0,999), e para os materiais de referência BRA/BCG/003 (R2 = 0,992), Moreau-RJ (R2 = 0,991), Tokyo (R 2 = 0,984) e Russian BCG-I (R 2 = 0,953). O LD e LQ encontrados foram de 0,014 ng/ml e 0,080 ng/ml, respectivamente. O método de dosagem de ATP em vacina BCG liofilizada apresentou boa repetibilidade com coeficiente de variação <19% para amostras de viabilidade e <12% para amostras de termoestabilidade, e boa precisão intermediária com coeficiente de variação de 16,2% para amostras de viabilidade e 25,9% para a referência BRA/BCG/003. O método também apresentou boa correlação com a contagem de UFC. Conclui-se que o método de dosagem de ATP em vacina BCG liofilizada obtém resultados com linearidade e precisão para estimar a viabilidade do BCG. Além disso, os resultados obtidos com o método apresentam boa correlação com os resultados obtidos com o método tradicional recomendado pela farmacopeia brasileira. Portanto, sugere-se que o método pode ser adequado para fins de controle da qualidade de vacinas BCG liofilizadas
Keywords in Portuguese
Vacina BCGLiofilização
Adenosina Trifosfatases
Farmacologia
Técnicas de Transferência de Energia por Ressonância de Bioluminescência
DeCS
Vacina BCGLiofilização
Adenosina Trifosfatases
Farmacologia
Técnicas de Transferência de Energia por Ressonância de Bioluminescência
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