Avaliação da reação em cadeia da polimerase na detecção de trypanosoma cruzi em soro e em sangue de pacientes com doença de chagas crônica

Abstract

O diagnóstico sorológico da doença de Chagas apresenta algumas desvantagens, tanto na fase aguda devido à falta de kits comerciais aprovados pela ANVISA, quanto na fase crônica, nos casos de diagnósticos inconclusivos ou discordantes, além de não ser o método ideal para diagnosticar a infecção por transmissão congênita. Uma alternativa para a confirmação é o uso da técnica da PCR que apresenta alta sensibilidade e especificidade. No presente trabalho, objetivou-se avaliar a eficácia da ferramenta da biologia molecular, indicada pelo Ministério da Saúde como diagnóstico confirmatório da doença de Chagas, a PCR, utilizando amostras de soro como um potencial meio de extração de DNA do parasito. Para isso, foram coletadas amostras de sangue e soro de 65 pacientes chagásicos (FC=39, FM=10, FD=5, FI=9 e DES=2), selecionados no Ambulatório de Doença de Chagas do Hospital Universitário Oswaldo Cruz. Todos os pacientes foram avaliados clinicamente para caracterização das formas clínicas e realizaram exames confirmatórios para infecção pelo T. cruzi. Além disso, também foram coletadas amostras de 35 indivíduos não chagásicos (área endêmica=9 e área não endêmica=26) que apresentaram sorologia negativa para infecção. Inicialmente, foram analisadas três formas de extração do material de sangue e soro. Após a escolha da melhor forma de extração, as amostras de sangue e soro dos pacientes chagásicos crônicos e não chagásicos foram aplicados na técnica de PCR com a finalidade de avaliar a sensibilidade e especificidade, como também a concordância dos resultados. Ocorreu predominância da forma cardíaca (60%) entre os portadores da infecção pelo T. cruzi. Os resultados da técnica de PCR, utilizando amostras de soro, apresentaram uma sensibilidade estatisticamente superior (61,3%) à amostra de sangue (41,5%). Quando analisado o resultado utilizando as amostras simultaneamente (sangue e soro), obteve-se um valor da sensibilidade aumentado para 78,5%, sendo estatisticamente semelhante ao obtido com o soro e diferente com o sangue. O resultado da estatística mostrou que não existiram diferenças entre as especificidades analisadas. A concordância observada foi de 77,9% (sendo considerada “boa”) com amostras de soro. Portanto, a técnica de PCR aqui padronizada, por apresentar fácil leitura dos resultados, é um potencial método molecular a ser aplicado em laboratórios de diagnóstico para confirmação de resultados inconclusivos.