Verificação de desempenho de método analítico de contagem de bacillus cereus presuntivo a partir de alimentos

Abstract

A verificação de método é um processo pelo qual um laboratório busca a confirmação de desempenho de um método já validado, garantindo que os dados obtidos atendem os requisitos específicos do ensaio normalizado. Este processo é uma exigência da NBR ABNT ISO 17025:2017 que é o sistema da qualidade amplamente utilizado em laboratórios de ensaio. O objetivo do presente trabalho foi verificar se o método descrito no POP 65.3240.003 que é baseado na ISO 7932:2004 – Método horizontal para a enumeração presuntiva de Bacillus cereus – Técnica de contagem de colônias a 30ºC, atende aos parâmetros para métodos quantitativos do DOQ-CGCRE-089. Este documento orienta sobre avaliação de desempenho de métodos analíticos voltados para a área de microbiologia que para métodos quantitativos, avalia os parâmetros repetibilidade e reprodutibilidade. Foi elaborado um protocolo com todos os parâmetros da verificação do ensaio de contagem de Bacillus cereus presuntivo realizado pela técnica de semeadura em superfície, em meio ágar manitol gema de ovo com polimixina (MYP). Como matriz foi utilizado leite desnatado estéril contaminado artificialmente com microrganismos de referência certificados (MRC) a uma concentração pré-estabelecida, sendo o microrganismo alvo Bacillus cereus MRC ATCC 11778 e o interferente Staphylococcus aureus MRC ATCC 6538. A repetibilidade foi realizada pela análise de 10 amostras pelo mesmo analista, utilizando meios de cultura, diluentes e vidrarias de mesmo lote num curto período. A reprodutibilidade foi realizada por dois analistas, utilizando as mesmas amostras, 10 para cada analista, mesmos lotes de insumos, e mesmo equipamento e no mesmo dia. Os critérios de desempenho estão descritos na ISO 7932:2004 que determina para repetibilidade (r) que a diferença em log10 dos valores das contagens de unidades formadoras de colônias (UFC) encontradas, não deve ser superior a 0,29 em 95% dos casos analisados na verificação do método. Para o limite de reprodutibilidade (R) esse valor não deve ser superior a 0,42 em 95% dos casos analisados. Os resultados obtidos, foram 100% das amostras analisadas na repetibilidade tiveram resultados iguais ou inferiores a 0,29 e 100% das amostras analisadas na reprodutibilidade tiveram resultados inferiores a 0,42. Após análise dos cálculos dos critérios de aceitação da avaliação de desempenho, conclui-se que o método utilizado para a contagem de Bacillus cereus presuntivo em amostras de leite desnatado estéril analisadas no Setor de Alimentos do Departamento de Microbiologia garante que os dados atendam a norma supracitada