Desenvolvimento e validação de uma plataforma de diagnóstico do tipo "Point-of-Care" para SARS-CoV-2

Abstract

A COVID-19 é uma doença respiratória infecciosa provocada pelo novo Coronavírus da Sindrome Respiratória Aguda Grave 2 (SARS-CoV-2). Devido suas variadas formas de transmissão, este novo vírus rapidamente se espalhou para todo o mundo causando a primeira pandemiaporum coronavírus na história. O diagnóstico laboratorial assume um importante papel no manejo clínico dos pacientes. Atualmente, a reação de transcriptase reversa seguida de reaçãoem cadeia da polimerase quantitativa (RT- qPCR) é o padrão-ouro parao diagnóstico molecular do SARS-CoV-2. No entanto, a técnica apresenta várias limitações para aplicação em diagnósticos point-of-care (PoC). Neste contexto, o RT-LAMP é uma ferramenta inovadora de diagnóstico que tem se mostrado resolutiva para o enfrentamento e manejo de doenças infecciosas. Trata-se de um teste simples, que não requer o uso de termocicladores, além de ser rápida, acurada e com um excelente custo- benefício. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar uma plataforma de diagnóstico do tipo POC para a detecção molecular do SARS- CoV-2 em amostras clínicas. Os ensaios RT-LAMP foram otimizados quanto as temperaturas, tempo, concentrações dos reagentes, visando avaliar a sensibilidade e especificidade analítica. Por fim, foi realizada a validação clínica utilizando 301 amostras suspeitas para o SARS-CoV-2 e a análise estatística dos resultados obtidos sob as condições otimizadas de 8 mM, 4U e 1.8 mM, respectivamente para os reagentes MgSO4, enzima Bst 3.0 e dNTPs. O RT-LAMP apresentou sensibilidade de 100%, detectando o SARS-CoV-2 em 15 minutos de reação, sem a extração do RNA. O desempenho do ensaio RT-LAMP revelou uma especificidade de 88,50% e acurácia geral de 95,17%. Quanto ao custo de cada reação RT-LAMP, o valor foi seis reais (R$ 6,00), sete vezes mais barato do que o qRT-PCR. Em conjunto, os resultados destacam o potencial de aplicação desta ferramenta na implementação de medidas e estratégias de controle para combater a disseminação do SARS-CoV-2, principalmente em áreas com recursos limitados, como é o caso do Brasil .