Desenvolvimento de antígenos quiméricos contendo múltiplos epítopos de células B dos vírus do sarampo (MeV) e rubéola (RuV) com potencial para aplicação no sorodiagnóstico

Abstract

O sarampo e a rubéola são doenças exantemáticas infecciosas de etiologia viral, causadaspelos vírus do sarampo (Measles vírus - MeV) evírusda rubéola(Rubella vírus – RuV) respectivamente. O sarampo foi considerado erradicado no Brasil entre os anos de 2016 e 2018, e a rubéola ainda se mantém sob controle. No entanto, a diminuição na coberturavacinal contra estes patógenos resultou nacriação de um ambiente propícioà sua reemergência, o que culminou na reintrodução do sarampo no Brasil em 2019. Os testes sorológicos utilizados atualmente no diagnóstico dessas doenças, apesar de sensíveis eespecíficos,sãoproduzidos por empresas privadas eapresentam altocusto de produção e aquisição para o Sistema Único de Saúde brasileiro.Dessa forma, o presentetrabalho tem oobjetivo de desenvolverantígenos quiméricos recombinantescontendomúltiplos epítopos de células B dosvírus sarampoe da rubéolacom potencial de aplicação no sorodiagnóstico. Para esse fim, foi realizado o desenhode dois genes quiméricos codificantesde proteínasrecombinantes contendo epítopos de células Bpresentes em três alvosimunogênicos do MeVedo RuV, as quais foram denominadas como MeVME e RuVMErespectivamente. A partir dos genes obtidos por síntese comercial, foram obtidas subconstruções contendo truncagens nas regiõesN-terminais (MeVME5 e RuVME2) ou C-terminais (MeVME3 e RuVME4). Os genes foram expressos em Escherichia coli. A avaliaçãoda solubilidade dos antígenos expressos foi realizada através dalise celular em gradiente de ureia.Os antígenos quiméricos expressos foram purificados por cromatografia deafinidade. As proteínas MeVME, MeVME3 e MeVME5 foramexpressas satisfatoriamente nos tamanhosde 50, 31 e 31 kDa, respectivamente, enquanto a proteína RuVME apresentou expressão reduzida no tamanho de 39 kDa. A proteína MeVMEse apresentou em corpos de inclusãona ausênciade ureia, que foram parcialmente desarranjados na presençade ureia. As proteínas MeVME, MeVME3 e MeVME5 foram purificadas com rendimentos de aproximadamente 300, 800 e 320 ng por mL de meio de cultura, apresentando purezas de aproximadamente 70, 85 e 80% respectivamente. As proteínas quiméricas MeVME, MeVME3 e MeVME5 apresentaram capacidade de discernimento entre soros IgG positivos e negativos nos ensaios de ELISA, apresentando variações densidade ótica entre esses soros de 0,822, 0,534 e 0,452 respectivamente. Por fim, as quimeras obtidas para o sarampo apresentaram alto potencial de utilização no sorodiagnóstico, e frente a futuras otimizações, faz-se possível a obtenção de plataformas nacionais de diagnóstico de baixo custo que poderão ser utilizadas na vigilância epidemiológica do sarampo, ao passo que as proteínas quiméricas da rubéola ainda necessitam de maiores otimizações .