Identificação in sílico de epítopos das proteínas estruturais e não estruturais que compõem o SARS-CoV-2 capazes de estimular as células T e B e avaliação da resposta imune in vitro e in vivo dos epítopos candidatos à vacina

Abstract

No final do ano de 2019 foi identificado o SARS-CoV-2, causador da doença COVID 19. O vírus se disseminou rapidamente provocando inúmeros casos em todos os continentes, colapsando os sistemas de saúde e econômico. Várias vacinas vêm sendo usadas em populações de todo o mundo, essencial para o controle da doença. Estudos que empregam ferramentas de imunoinformática vem sendo utilizada com o objetivo de mapear epítopos e selecionar aqueles que induzam respostas imunes protetoras como alvo vacinal. Assim, o presente projeto propõe-se a identificar e caracterizar epítopos de células T e B para as proteínas estruturais e não estruturais do SARS-CoV-2 para o desenvolvimento de uma vacina baseada em peptídeos e sua avaliação quanto a respostas imune humoral e celular in vitro e in vivo, configurando ensaios pré-clínicos de uma vacina contra a COVID-19. Como hipótese do nosso estudo o uso de ferramentas computacionais de predição podem ajudar a caracterizar epítopos imunogênicos e antigênicos como alvos vacinais. Utilizando softwares de predição, diversos epítopos foram preditos para as proteínas estruturais e não estruturais, onde para epítopos de linfócitos T CD8+ foram preditos 3.765 epítopos no total, já para linfócitos T CD4+ foram preditos 14.836 epítopos e para LB foram preditos 237 epítopos no total. Os epítopos escolhidos para a vacina foram aqueles que se apresentaram imunogênicos, antigênicos e indutores de IFN-�. Um mix de 3 peptídeos derivados de proteínas estruturais do SARS-CoV-2 foram escolhidos para os ensaios in vitro e in vivo. Os peptídeos P1, P2 e P3 não se mostraram citotóxicos em células Vero E6 por até 48h em diferentes concentrações: 0,9 µg/µL, 1,8 µg/µL e 3,6 µg/µL. O mix de peptídeos P1/P2/P3 na concentração de 1,8 µg/µL não se mostrou citotóxico em PBMCs por até 96h. O uso do mix de peptídeos com objetivo de diagnóstico sorológico de anticorpos IgM, IgG e IgA anti-SARS-CoV-2 o teste apresentou alta sensibilidade e especificidade (p<0,0001, IC 95%) para a dosagem dos 3 anticorpos. Em estímulo do mix de peptídeos a 1,8 µg/µL em PBMCs de indivíduos que foram vacinados com a vacina bivalente PfizerTM apresentou indução de CCL-2 (p<0,05, IC 95%), IL-6 e IL-10. Camundongos BALB/c foram imunizados com o mix de peptídeos a 1,8 µg/µL, com 2 doses em intervalo de 14 dias e o sangue total foi coletado 14 dias após cada dose. Na dosagem de citocinas do soro dos camundongos imunizados não apresentou resultado dos níveis séricos de citocinas no soro dos animais das duas doses. Na quantificação de anticorpos IgG totais no soro dos camundongos imunizados, o grupo de animais imunizados com o mix de peptídeos apresentou resultado promissor (p=0,02, IC 95%) comparado aos demais grupos, indicando que o imunizante induziu a produção de anticorpos específicos contra os peptídeos. Os peptídeos escolhidos por nosso estudo apresentou resultados promissores como possível imunizante contra a COVID-19, além de poder ser usado no diagnóstico de anticorpos anti-SARS-CoV-2. (AU) .