Avaliação do papel da proteína NS3 do vírus da dengue na proteção ou patogênese em camundongos

Abstract

A dengue é considerada uma das mais importantes arboviroses humanas, sendo causa de morbidade e mortalidade na maioria das regiões tropicais e subtropicais do mundo. Os sintomas da doença variam desde a febre do dengue até a febre hemorrágica e síndrome do choque. O desenvolvimento de uma vacina contra dengue, que confira imunidade protetora de longa duração contra os quatro sorotipos, é uma das prioridades da Organização Mundial da Saúde (OMS). Porém, tais estudos esbarram em algumas dificuldades, entre elas a pouca compreensão da patogênese da doença principalmente no que diz respeito aos casos mais graves. Algumas evidências apontam a proteína não estrutural 3 (NS3) de dengue como antígeno protetor, por um lado, enquanto outras sugerem que esta proteína está relacionada à patogênese da doença. Sendo assim, este trabalho visa avaliar o efeito da expressão da proteína NS3 em camundongos utilizando vacinas de DNA, no que concerne à proteção e/ou patogênese da dengue, e estudar as respostas imunes envolvidas nestes processos. Inicialmente, a capacidade protetora da NS3 inteira ou somente seus domínios funcionais (protease e helicase) foi avaliada em animais vacinados e desafiados com vírus da dengue sorotipo 2 (DENV2). Observamos que 90% e 80% dos animais imunizados com os plasmídeos baseados na NS3 inteira, pcTPANS3 e pcNS3, respectivamente, sobreviveram ao desafio. Entretanto, 40% e 60% destes camundongos apresentaram sinais clínicos da doença. Nos animais imunizados com os plasmídeos que codificam a helicase (pcTPANS3H e pcNS3H), a taxa de sobrevivência foi de aproximadamente 75%, enquanto que os plasmídeos que codificam a região da protease (pcTPANS3P ou pcNS3P) não foram capazes de conferir proteção aos animais. Posteriormente, avaliamos o efeito das imunizações com alguns destes plasmídeos no tecido hepático dos animais não infectados com DENV, e detectamos áreas focais com hemorragia e edema, que foram maiores em animais inoculados com plasmídeos que codificam a proteína NS3 inteira ou a porção helicase. Foram observados, também, danos no parênquima e aumento dos níveis séricos da enzima hepática alanina aminotransferase (ALT) em animais imunizados com o plasmídeo que codifica a porção protease da NS3. Apesar dos focos de edema e hemorragia, não foram detectadas alterações de permeabilidade vascular no fígado ou em outros órgãos analisados de animais inoculados com os plasmídeos que codificam a proteína NS3 inteira. Os animais infectados com DENV2 por via intra-cerebral (i.c.) apresentaram alterações vasculares no baço, fígado, estômago e rins no período do aparecimento dos sinais clínicos da infecção. A ocorrência de danos no fígado de animais que expressam a proteína inteira foi acompanhada de aumento de células T iii CD8+ neste órgão, além do aumento de células T CD4+ e T CD8+ ativadas no sangue, detectadas por citometria de fluxo. Além disso, foi observada uma resposta imune celular com produção de interferon gamma (IFN-γ) em esplenócitos provenientes destes animais, após estímulo com um peptídeo presente na NS3 e descrito como imunogênico para camundongos Balb/c. Portanto, os resultados sugerem a participação de uma resposta imune celular no mecanismo de proteção induzido pelas vacinas de DNA baseadas na NS3 nos testes de desafio com DENV por via i.c.. Contudo, esta resposta pode estar envolvida também na indução dos danos hepáticos observados nos animais imunizados.