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Title: Suscetibilidade in vitro de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii frente a drogas antifúngicas pela citometria de fluxo
Advisor: Lazéra, Márcia dos Santos
Trilles, Luciana
Members of the board: Fracalanzza, Sergio Eduardo Longo
Neufeld, Paulo Murillo
Igreja, Ricardo Pereira
Horn, Cynthia
Authors: Morales, Bernardina Penarrieta
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Abstract: Cryptococcus neoformans (C. n) e Cryptococcus gattii (C. g) são agentes da criptococose. A carência de publicações sobre teste de suscetibilidade de C. n e principalmente de C. g é evidente. A maioria de isolados clínicos de C. g mostra-se suscetível in vitro a fluconazol e itraconazol; no entanto o surgimento de resistência a drogas antifúngicas incentivou os testes de suscetibilidade in vitro. Como conseqüência, Clinical and Laboratory Standadards Institute \2013 CLSI, anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards \2013 NCCLS, publicaram metodologia padronizada M27-A2 para alcançar reprodutibilidade e permitir a comparação de resultados de suscetibilidade entre laboratórios, porém alguns problemas como o tempo de incubação e o padrão de leitura levaram à busca de técnicas alternativas, tais como a citometria de fluxo. O objetivo deste trabalho é padronizar a técnica de citometria de fluxo para o teste de suscetibilidade in vitro de C.n e C.g. visando a redução do tempo de incubação, a utilização de leitura automatizada e a obtenção de resultados rápidos e reprodutíveis A concentração inibitória mínima (CIM) de 20 isolados de C.n e 21 de C.g foi determinada por citometria de fluxo e os resultados comparados com o protocolo padrão proposto pelo CLSI/M27A-2. Após duas horas de incubação com anfotericina B utilizando FUN-1, C. gattii resultou em 100% de concordância entre as duas técnicas para diluição de 2\03BCg/mL e 95,2% para 1\03BCg/mL e C. neoformans resultou em 100% de concordância para 1 e 2\03BCg/mL. Para azólicos e flucitosina, foram obtidos resultados reprodutíveis com o fluorocromo Acridine Orange após 18 horas de incubação, que resultou em 78% de concordância entre as duas técnicas para fluconazol, 85% para itraconazol e 97% para flucitosina. Em ambas as metodologias, C. gattii foi menos suscetível do que C. neoformans frente ao itraconazol e flucitosina (p<0,05). A citometria de fluxo é uma ferramenta útil, com potencial para testes in vitro e determinação da CIM dos antifúngicos estudados, com apreciável redução do tempo mínimo para obtenção de resultados
Abstract: Cr yptococcus neoformans ( C.n ) and Cryptococcus gattii ( C.g ) are the agents of cryptococcosis. The lack of publications on susceptibility tests of C.n and especially C.g is evident. Most clinical isolates of C.g proved to be susceptible in vitro to fluconazol e and itraconazole and yet the emergence of resistance to antifungal drugs encouraged susceptibility testing in vitro . As a consequence, Clinical and Laboratory Standadards Institute – CLSI ( National Committee for Clinical Laboratory Standards – NCCLS ) pub lished standardized methodology to achieve reproducibility and allow comparison of susceptibility results between laboratories (M27 - A2 document) , however some problems of methodology, like incubation time and standard reading, led to the search for alterna tive techniques, such as flow cytometry. The objective of this work is to standardize the technique of flow cytometry to test the in vitro susceptibility of C . n and C . g in order to reduce the incubation time, use of automated reading and obtain fast and re producible results . The minimum inhibitory concentration (MIC) of 20 isolates of C.n and 21 of C.g was determined by flow cytometry and the results compared with the standard protocol proposed by CLSI/M27A - 2. Flow citometry showed 100% agreement with CLSI/ M27A - 2 results for 2 μ g/mL and 95.2% for 1 μ g/mL dilution when C.g isolates were tested, and 100% agreement for 1 and 2 μ g/ml dilution when C.n were tested after two hours of incubation with amphotericin B using FUN - 1 . Reproducible results were obtained with fluorochrome Acridin e Orange for azoles and flucytosine after 18 hours incubation, resulting in 78% agreement for fluconazole, 85% for itraconazole and 97% for flucytosine. C.g was less susceptible than C.n against itraconazole and flucytosine (p <0.05) in both methodologies. Flow cytometry is a useful tool, with potential for in vitro susceptibility test s of the antifungal agents studied, with appreciable reduction in the minimum time for achieving results.
DeCS: Cryptococcus gattii
Antifúngicos
Cryptococcus neoformans
Citometria de Fluxo /métodos
Issue Date: 2009
Citation: MORALES, B. P. Suscetibilidade in vitro de Cryptococcus neoformans E Cryptococcus gattii frente a drogas antifúngicas pela citometria de fluxo. 2009. 49f. Dissertação (Mestrado em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas) – Fundação Oswaldo Cruz, Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas, Rio de Janeiro, 2009
Date of defense: 2009
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas
Program: Programa de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosas
Copyright: open access
Appears in Collections:INI - PCDI - Dissertações de Mestrado

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