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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34201
ESTUDO DO POLIMORFISMO-670 E DA EXPRESSÃO DO GENE FAS NA LEISHMANIOSE CUTÂNEA: POSSÍVEL ASSOCIAÇÃO COM DADOS CLÍNICOS
Santos, Gilvaneia Silva | Date Issued:
2004
Author
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.
Abstract in Portuguese
A expressão de Fas/FasL tem sido descrita como crucial para resistência à infecção por Leishmania, independente de uma resposta Th1, no modelo murino. Visto que esses dados na leishmaniose humana sâo ausentes, nós quantificamos a expressão de Fas (CD95) ex vivo em PBMC de pacientes com leishmaniose cutânea localizada e investigamos o polimorfismo - 670 da região promotora do gene Apo>1/Fas por PCR-RFLP. Foram realizadas marcações com anti-CD95 e marcadores de linhagens (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16, 16b, CD56 e CD49d) em PBMC separados pelo gradiente de densidade e análise por citometria de fluxo. Quarenta pacientes com leishmaniose cutânea localizada (oriundos da área endêmica de Jequié e Jequiriçá-Ba) foram incluídos após consentimento livre e esclarecido. Os resultados foram comparados com um grupo de 27 controles urbanos sadios e correlacionados com dados clínicos e demográficos (idade, IDRM, sorologia, tamanho de lesão, tempo da doença). As análises do polimorfismo na posição -670 do gene Fas demonstraram que o genótipo GG foi o mais freqüente entre os pacientes com LCL (45%), com 35% e 20% de GA e AA, respectivamente. Em controles normais, a freqüência dos genótipos GA, AA e GG foram 51,9%, 18,5% e 29,6%, respectivamente. A expressão de Fas em PBMC, dos pacientes comparados com os controles, foi aumentada em linfócitos e monócitos, mas um maior aumento foi observado em monócitos. A expressão de Fas em monócitos correlacionou negativamente (p=0,03, r=-0,53) com duração da doença. Nenhuma correlação foi observada entre a expressão de Fas e resposta imune humoral (IgG anW-Leishmania) ou celular (IDRM), sugerindo que a expressão de Fas e/ou apoptose poderia ser um terceiro parâmetro imune independente modificando a evolução da doença.
Abstract
Fas/FasL expression has been shown to be crucial to resistance to Leishmania infection, independent of a Th1 immune response, in the murine model. Since data in human leishmaniasis are lacking, we quantified ex vivo Fas (CD95) expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with localized cutaneous leishmaniasis and we investigated the promoter- 670 polymorphism in the Apo-1/Fas gene by PCR-RFLP. Staining with anti-CD95 and lineage markers (CD3, CD4, CD14, CD16, CD16b, CD19, CD56 and CD49d) was performed on density gradient-separated PBMC and analysis by flow cytometry. Forty patients with localized cutaneous leishmaniasis (from endemic area of Jequié and Jequiriçá-BA) were included after informed consent was obtained. Results were compared to a group of 27 healthy urban controls and correlated to clinical and demographic data (age. DTH, serology, lesion size, disease duration). Analyses showed that the Fas-GG (-670 polymorphism) genotype was the most frequent in patients with CL (45%), whereas 35,0% and 20,0% displayed GA and AA genotypes, respectively. In normal controls, the GA, AA and GG frequencies were 51,9%, 18,5% and 29,6%, respectively. Fas expression in patients, compared to controls, was increased in lymphocytes and monocytes, but the strongest increase was observed in monocytes. Monocyte Fas expression was negatively correlated (p=0.03, r=-0.53) to disease duration. No correlation was observed, however, with cellular (DTH) or humoral (anti- Leishmania IgG) immune response, indicating that Fas expression, and possibly apoptosis, might be a third, independent, disease-modifying immune parameter.
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