Please use this identifier to cite or link to this item:
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/47062
COLORIMETRIC RT‑LAMP SARS‑COV‑2 DIAGNOSTIC SENSITIVITY RELIES ON COLOR INTERPRETATION AND VIRAL LOAD
Loop Mediated Isothermal Amplifcation
Reverse Transcriptase
Coronavirus Infections
Reagent Kits, Diagnostic
Point-of-Care Testing
Infecciones por Coronavirus
Juego de Reactivos para Diagnóstico
Pruebas en el Punto de Atención
Infecções por Coronavirus
Kit de Reagentes para Diagnóstico
Testes Imediatos
Author
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Departamento de Microbiologia. São Paulo, SP, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Departamento de Microbiologia. São Paulo, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Secretaria Estadual de Saúde. Laboratório Central do Estado do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Secretaria Estadual de Saúde. Laboratório Central do Estado do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. São Paulo, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Departamento de Microbiologia. São Paulo, SP, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Departamento de Microbiologia. São Paulo, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Secretaria Estadual de Saúde. Laboratório Central do Estado do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Secretaria Estadual de Saúde. Laboratório Central do Estado do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Universidade de São Paulo. Plataforma Científica Pasteur. São Paulo, SP, Brasil. / Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. São Paulo, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Laboratório de Ciências e Tecnologias Aplicadas em Saúde. Curitiba, PR, Brasil.
Abstract
The use of RT-LAMP (reverse transcriptase—loop mediated isothermal amplifcation) has been considered as a promising point-of-care method to diagnose COVID-19. In this manuscript we show that the RT-LAMP reaction has a sensitivity of only 200 RNA virus copies, with a color change from pink to yellow occurring in 100% of the 62 clinical samples tested positive by RT-qPCR. We also demonstrated that this reaction is 100% specifc for SARS-CoV-2 after testing 57 clinical samples infected with dozens of diferent respiratory viruses and 74 individuals without any viral infection. Although the majority of manuscripts recently published using this technique describe only the presence of two-color states (pink =negative and yellow=positive), we verifed by naked-eye and absorbance measurements that there is an evident third color cluster (orange), in general related to positive samples with low viral loads, but which cannot be defned as positive or negative by the naked eye. Orange colors should be repeated or tested by RT-qPCR to avoid a false diagnostic. RT-LAMP is
therefore very reliable for samples with a RT-qPCR Ct < 30 being as sensitive and specifc as a RT-qPCR
test. All reactions were performed in 30 min at 65 °C. The use of reaction time longer than 30 min is also not recommended since nonspecifc amplifcations may cause false positives.
Keywords in Portuguese
COVID-19Keywords
RT-LAMPLoop Mediated Isothermal Amplifcation
Reverse Transcriptase
Coronavirus Infections
Reagent Kits, Diagnostic
Point-of-Care Testing
Keywords in Spanish
ADN Polimerasa Dirigida por ARNInfecciones por Coronavirus
Juego de Reactivos para Diagnóstico
Pruebas en el Punto de Atención
DeCS
Transcriptase ReversaInfecções por Coronavirus
Kit de Reagentes para Diagnóstico
Testes Imediatos
Share