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AutorGaldino, Tainah Silva
AutorMenna-Barreto, Rubem Figueiredo Sadok
AutorBritto, Constança
AutorSamudio, Franklyn
AutorBrandão, Adeilton
AutorKalume, Dário Eluan
Data de acesso2015-05-04T17:07:34Z
Data de disponibilização2015-05-04T17:07:34Z
Data do publicação2014
CitaçãoGALDINO, Tainah Silva et al. Cell disruption using a different methodology for proteomics analysis of Trypanosoma cruzi strains. Analytical Biochemistry, v.448, p.1-8, 2014.pt_BR
URIhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/10231
Idiomaengpt_BR
EditorElsevierpt_BR
Direito Autoralrestricted access
Palavras-chaveTrypanosoma cruzipt_BR
Palavras-chaveProteômicapt_BR
Palavras-chaveEspectrometria de Massaspt_BR
Palavras-chaveCitometria de Fluxopt_BR
TítuloCell disruption using a different methodology for proteomics analysis of Trypanosoma cruzi strainspt_BR
Tipo do documentoArticle
DOI10.1016/j.ab.2013.11.010pt_BR
Resumo em InglêsWe have developed a cell disruption method to produce a protein extract using Trypanosoma cruzi cells based on a straightforward hypoosmotic lysis protocol. The procedure consists of three steps: incubation of the cells in a hypoosmotic lysis buffer, sonication in a water bath, and centrifugation. The final protein extract was designated TcS12. The stages of cell disruption at different incubation times were monitored by differential interference contrast microscopy. After 30 min of incubation in lysis buffer at 4 C, the T. cruzi epimastigote forms changed from slender to round-shaped parasites. Nevertheless, cell disruption took place following sonication of the sample for 30 min. The efficiency of the methodology was also validated by flow cytometry, which resulted in 72% of propidium iodide (PI)-labeled cells. To estimate the protein extraction yield and the differential protein expression, the proteomics profile of four T. cruzi strains (CL-Brener, Dm28c, Y, and 4167) were analyzed by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LCMS/MS) on a SYNAPT HDMS system using the label-free MSE approach. ProteinLynx Global Server (version 2.5) with ExpressionE analysis identified a total of 1153 proteins and revealed 428 differentially expressed proteins among the strains. Gene ontology analysis showed that not only cytosolic proteins but also nuclear and organellar ones were present in the extract.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular e Doenças Endêmicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (ICGES). Laboratório de Parasitologia. Panamá, Panamá.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.pt_BR
AfiliaçãoFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.pt_BR
Palavras-chave em inglêsHypotonic lysis bufferpt_BR
Palavras-chave em inglêsWater bath sonicationpt_BR
Palavras-chave em inglêsMass spectrometrypt_BR
Palavras-chave em inglêsTrypanosoma cruzipt_BR
Palavras-chave em inglêsFlow cytometrypt_BR
Palavras-chave em inglêsProteomicspt_BR
Palavras-chave em espanholTrypanosoma cruzipt_BR
Palavras-chave em espanholProteómicapt_BR
Palavras-chave em espanholEspectrometría de Masaspt_BR
DeCSProteômicapt_BR
DeCSEspectrometria de Massaspt_BR
DeCSCitometria de Fluxopt_BR


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Nome:
tainah_galdinoetal_IOC_2014.pdf
Tamanho:
1.094Mb
Formato:
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