Advisor | Silva, Carlos Eduardo Calzavara | pt_BR |
Author | Ferreira, Jorge Gomes Goulart | pt_BR |
Access date | 2015-06-18T17:05:57Z | |
Available date | 2015-06-18T17:05:57Z | |
Document date | 2015 | |
Citation | FERREIRA, Jorge Gomes Goulart. Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu vírus. 2015. 94 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)-Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde, Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde)-Centro de Pesquisas René Rachou, Fundação Oswaldo Cruz, Belo Horizonte, 2015 | pt_BR |
URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/10917 | |
Abstract in Portuguese | A família Bunyaviridae consiste em uma das maiores e mais diversificadas famílias de vírus de RNA, contendo cerca de 350 vírus sorologicamente distintos. O Apeu virus (APEUV) é um vírus da família Bunyaviridae que se destaca por seu grande potencial emergente. Isolado pela primeira no Brasil, este vírus pode causar uma doença que apresenta sintomas semelhantes aos da gripe, como febre alta, dor de cabeça e mialgia, associadas geralmente a náuseas, vômitos, fraqueza e fotofobia. Entretanto, apesar de seu potencial patogênico, pouco se sabe sobre a sua interação com o sistema imunológico humano. Com o objetivo de estudar alguns aspectos da resposta imune, principalmente a reposta inata desencadeada pela infecção do APEUV, a expressão de 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, MyD88,
IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, ROBO-3(RIG-1), IFIH1(MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) foi analisada. Para tal, foram feitos ensaios de qPCR baseados na metodologia TaqMan®, utilizando cDNA obtido a partir de RNA total extraído de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e de células A549 (linhagem derivada de carcinoma pulmonar humano), infectadas ou não com APEUV por períodos de 4 ou 8 horas. Como controles, foram utilizadas células
infectadas com o vírus da estomatite vesicular (VSV) como controle positivo de uma
infecção por vírus de RNA fita simples, e células tratadas com o mock das amostras
de vírus como controle negativo. Os dados obtidos foram analisados em software
específico. Nossos resultados indicam que PBMC infectadas com APEUV por 4 horas (m.o.i.=1 e m.o.i.=3) induzem um aumento na expressão de TLR9 e IFNβ.
Quando quantificada a expressão de genes em células A549 infectadas com APEUV
(m.o.i.=1 por 4 horas) comparadas com o mock, verificou-se um aumento da
expressão dos genes TLR9, IRF3 e IRF7 e no período de 8 horas, também comparando com o mock, verificou-se aumento de forma significativa na expressão de TLR 9, além de um aumento na expressão de TLR3, TLR7, TRAF3 , IRF7 e IFNβ.
Verificamos ainda que, após escolher um gene housekeeping através de método estatístico, células A549 infectadas com APEUV em uma m.o.i.=1, tende a aumentar a expressão dos genes IFNβ eTICAM-I, fundamentais na indução de um estado
celular antiviral. Estudos posteriores são necessários para a determinação dos
mecanismos envolvidos na resposta imune inata humana contra o Apeu virus | pt_BR |
Language | por | pt_BR |
Rights | open access | pt_BR |
Subject in Portuguese | Infecções por Vírus de RNA | pt_BR |
Subject in Portuguese | Vírus de RNA | pt_BR |
Subject in Portuguese | Bunyaviridae/isolamento e purificação | pt_BR |
Title | Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu virus | pt_BR |
Type | Dissertation | pt_BR |
Defense date | 2015 | pt_BR |
Defense Institution | Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou | pt_BR |
Degree level | Mestrado Acadêmico | pt_BR |
Place of Defense | Belo Horizonte/MG | pt_BR |
Program | Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde | pt_BR |
Co-Advisor | Oliveira, Jaquelline Germano de | pt_BR |
Co-Advisor | Villani, Fernanda Nobre Amaral | pt_BR |
Abstract | The Bunyaviridae family consists of the largest and most diverse families of RNA viruses, containing about 350 serologically distinct viruses. The Apeu virus (APEUV) is a member of the Bunyaviridae family that stands out for its large emerging potential. First isolated in Brazil, this virus can cause a flu-like disease with symptoms such as fever, headache and myalgia, usually associated with nausea, vomiting, weakness and photophobia. However, despite their pathogenic potential, little is known about their interaction with the human immune system. In order to study some aspects of the immune response, especially the innate response triggered by APEUV infection, the expression of 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8,
TLR9, MyD88, IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, robot-3 (RIG-1) IFIH1 (MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) was analyzed. For that, qPCR assays were performed based on the TaqMan method using cDNA obtained from mRNA extracted from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and A549 cells (cell line derived from human lung carcinoma) infected or not by APEUV for 4 or 8 hours. Cells infected with vesicular stomatitis virus (VSV) were used as a positive control of infection with single stranded RNA viruses; also mock infected cells were used as controls. The data were analyzed using specific software. Our results
suggested that APEUV infection on PBMC induce an increase of TLR9 and IFNβ
expression on both situations with m.o.i=1 or m.o.i=3. On the A549 cell line, APEUV
infection increased the expression of TLR9, TLR3, TLR7, TRAF3, IRF7 and IFNβ using m.o.i=1 and 4h infection condition, compared to mock control. After using a statistical methodology to choose a housekeeping gene, we verified that APEUV infection with m.o.i=1, increase the expression of IFNβ and IRF9 in A549 cells. A cell antiviral state is induced by the presence of IFNβ and IRF9. Further studies are needed to determine the mechanisms involved in human innate immune response against APEUV. | pt_BR |
Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil. | pt_BR |
Member of the board | Silva, Carlos Eduardo Calzavara | pt_BR |
Member of the board | Oliveira, Edward José de | pt_BR |
Member of the board | Ferreira, Paulo César Peregrino | pt_BR |