Evidence of autophagy in Tripanosoma Cruzi cells by quantum dots

Abstract

A toxicidade de nanopartículas como quantum dots (QDs) tem sido extensivamente estudada em células procariontes e eucariontes. Neste contexto, utilizamos QDs cobertos com ácido mercaptoacético, sintetizado em um meio aquoso, a fim de avaliar efeitos nanocitotóxicos como morte celular por autofagia, em Trypanosoma cruzi. Foram utilizados dois tipos de marcadores de autofagia: 3-metiladenina (3-MA) um inibidor de fosfatidilinositol 3-kinase (PI3-K) e monodansilcadaverina (MDC) um composto fluorescente lisossomotrópico usado na identificação de cadaverina, proteína presente em vacúolos autofágicos. A quantificação de parasitas tratados com 3-MA e / ou incubados com 2 e 200 μM de QDs foi feita a partir da curva de crescimento. Em seguida, os parasitas foram processados para micorscopia eletronica de transmissão (MET) e marcados com MDC, sendo as vacúolos autofágicos MDC positivas qualitativamente analisadas. Os resultados obtidos da curva de crescimento indicaram uma diminuição do número de parasitas incubados com 200 μM de QDs quando comparados com parasitas incubados com 2 μM de QDs e o grupo controle. Em contrapartida, parasitas incubados com 200 μM de QDs e tratados com 10 e 15 mM de 3-MA, mostraram uma reversão dose-dependente (10% e 15%) da morte celular por autofagia. Os parasitas marcados com MDC demonstraram a presença de muitos vacúolos autofágicos. Além disso, encontramos alterações morfologicas ultraestruturais nos parasitas incubados com 2 μM e 200 μM QDs quando comparado com o grupo controle. Nossos resultados demonstram que altas concentrações de QDs são tóxicos para T. cruzi, induzindo morte celular por autofagia.