Estudo dos mecanismos de ação do tetranortriterpenóide de origem natural, gedunina, na sinalização de receptores tipo Toll e inflamassoma

Abstract

A ativação dos receptores do tipo toll (TLR) por padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) desencadeia uma resposta imune inata, através da produção de citocinas e da ativação de inflamassoma. Neste trabalho, nós investigamos o efeito da gedunina, um tetranortriterpenóide de origem natural, sobre a ativação de TLR in vitro e in vivo. O pré e o pós-tratamento de camundongos C57BL/6 com gedunina (i.p.) inibiu a migração de células mononucleares, eosinófilos e neutrófilos para a cavidade pleural estimulada com lipopolisacarídeo bacteriano (LPS), assim como reduziu a produção do fator de necrose tumoral (TNF)-\03B1, interleucina (IL)-6 e óxido nítrico (NO). O pós-tratamento in vitro de macrófagos murinos imortalizados com gedunina também modulou negativamente a produção destes mediadores inflamatórios induzida por LPS. O tratamento com gedunina também reduziu a ativação do inflamassoma NLRP3 induzida por LPS em leucócitos pleurais in vivo e em macrófagos imortalizados in vitro. Além disto, a gedunina inibiu a ativação de caspase-1 e, consequentemente, a produção de IL-1\03B2 in vivo e in vitro, após estímulo com LPS De forma interessante, além de inibir a produção de mediadores pró-inflamatórios, a gedunina induziu a expressão dos fatores anti-inflamatórios heme oxigenase-1 (HO-1), Hsp70 e IL-10. Também demonstramos que o efeito da gedunina não é restrito à sinalização de TLR4. Esta substância também reduziu a produção de mediadores TNF-\03B1, IL-6, NO, IL-1 \03B2 e a expressão de NLRP3, assim como induziu o aumento de IL-10 e HO-1, em macrófagos estimulados com os agonistas de TLR2 e TLR3, PAM3CSK4 e POLY I:C. Estudos de modelagem in silico revelaram que a gedunina pode se ligar de forma eficiente a caspase-1, TLR2, TLR3 e ao MD-2 do complexo receptor TLR4. Em conjunto, os nossos dados demonstram que a gedunina modula a respostas mediadas por TLR4, TLR3 e TLR2 e ainda revelam novos alvos moleculares deste tetranortriterpenóide