| Author | Nascimento, D. V. | |
| Author | Lemes, E. M. B. | |
| Author | Queiroz, J. L. S. | |
| Author | Silva Jr., J. G. | |
| Author | Nascimento, H. J. | |
| Author | Silva, E. D. | |
| Author | Hirata Jr., R. | |
| Author | Dias, A. A. S. O., | |
| Author | Santos, C. S. | |
| Author | Pereira, G. M. B. | |
| Author | Guaraldi, A. L. Mattos | |
| Author | Armoa, G. R. G. | |
| Access date | 2017-10-19T10:49:28Z | |
| Available date | 2017-10-19T10:49:28Z | |
| Document date | 2010 | |
| Citation | NASCIMENTO, D. V. et al. Expression and purification of the immunogenically active fragment B of the Park Williams 8 Corynebacterium diphtheriae strain toxin. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v.43, p.460-466, 2010. | pt_BR |
| ISSN | 0100-879X | pt_BR |
| URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/22876 | |
| Language | eng | pt_BR |
| Publisher | Associação Brasileira de Divulgação Científica | pt_BR |
| Rights | open access | |
| Subject in Portuguese | Difteria | pt_BR |
| Subject in Portuguese | Escherichia coli | pt_BR |
| Subject in Portuguese | Expressão Gênica | pt_BR |
| Subject in Portuguese | Afinidade do metal imobilizado | pt_BR |
| Title | Expression and purification of the immunogenically active fragment B of the Park Williams 8 Corynebacterium diphtheriae strain toxin | pt_BR |
| Type | Article | |
| Abstract | The construction of a hexahistidine-tagged version of the B fragment of diphtheria toxin (DTB) represents an important step in
the study of the biological properties of DTB because it will permit the production of pure recombinant DTB (rDTB) in less time
and with higher yields than currently available. In the present study, the genomic DNA of the Corynebacterium diphtheriae Park
Williams 8 (PW8) vaccine strain was used as a template for PCR amplification of the dtb gene. After amplification, the dtb gene
was cloned and expressed in competent Escherichia coli M15™ cells using the expression vector pQE-30™. The lysate obtained
from transformed E. coli cells containing the rDTBPW8 was clarified by centrifugation and purified by affinity chromatography.
The homogeneity of the purified rDTBPW8 was confirmed by immunoblotting using mouse polyclonal anti-diphtheria toxoid antibodies
and the immune response induced in animals with rDTBPW8 was evaluated by ELISA and dermonecrotic neutralization
assays. The main result of the present study was an alternative and accessible method for the expression and purification of
immunogenically reactive rDTBPW8 using commercially available systems. Data also provided preliminary evidence that rabbits
immunized with rDTBPW8 are able to mount a neutralizing response against the challenge with toxigenic C. diphtheriae | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil / Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Faculdade de Ciências Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Faculdade de Ciências Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Faculdade de Ciências Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ. Brasil / Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Faculdade de Ciências Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Universidade do Estado do Rio de Janeiro. Faculdade de Ciências Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | pt_BR |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ. Brasil. | pt_BR |
| Subject | Fragment B | pt_BR |
| Subject | Diphtheria | pt_BR |
| Subject | dtb gene | pt_BR |
| Subject | E. coli gene expression | pt_BR |
| Subject | Immobilized metal affinity | pt_BR |
| e-ISSN | 1414-431X) | |
