Desenvolvimento de meios seletivos para contagem de leveduras em membrana filtrante para monitorar a poluição no Lago Juturnaíba, Rio de Janeiro

Abstract

Os múltiplos e intensos usos da água têm causado crescente poluição e impactos nos ecossistemas aquáticos. Considerando que os coliformes termotolerantes refletem a poluição fecal, e os parâmetros químicos a qualidade imediata da água, seria desejável usá-los juntamente a indicadores complementares. O uso da contagem de leveduras como bioindicador da qualidade da água tem sido proposto. A estrutura de suas comunidades muda de acordo com os fatores ambientais, incluindo os impactos antrópicos oriundos dos efluentes domésticos e das atividades agrícolas. No entanto, as contagens de leveduras pelos métodos de cultivo são dificultadas pela competição com os bolores, além do que, as técnicas que reduzem os bolores, também afetam as leveduras. Buscamos desenvolver um método para contagem de leveduras em amostras de água, através dos meios BIL(Base de isolamento de leveduras) seletivos, e avaliar preliminarmente o potencial das leveduras isoladas como bioindicadoras da qualidade da água. Coletamos 46 amostras de 08 pontos no Lago de Juturnaíba/RJ. Foram aferidos os parâmetros temperatura, pH, OD, Saturação de OD, SDT, condutividade e DBO5. Analisamos leveduras utilizando o método de membrana filtrante, incubada sobre suporte, com novas variações seletivas da Base de Isolamento de Leveduras (BIL) em caldo, suplementada com diferentes fontes de Carbono e inibidores. Procedemos as contagens de UFC/100mL e isolamos os diferentes morfotipos observados. Procedemos a identificação polifásica das culturas. Foram feitas as análises do NMP de Escherichia coli, Coliformes Totais e Enterococcus sp. e foram realizadas análises qualitativas das bactérias potencialmente patogênicas. Buscamos relacionar as médias geométricas dos resultados microbiológicos e as médias aritméticas dos dados físico-químicos através da correlação linear de Pearson e de Regressão Múltipla. Obtivemos contagens significativas de leveduras de até mais que 10.000/100mL nos pontos-controle de águas limpas e águas poluídas na região. Foram usados como inibidores Cicloeximida, etanol ou corante verde-bromo-cresol e como fonte de carbono glicose ou galactose. Não houve interferências significativas de bolores quando usamos esses meios seletivos. Duzentos e trinta e cinco culturas de leveduras foram isoladas e identificadas por taxonomia convencional e vinte e cinco culturas representativas tiveram suas identificações confirmadas pelo seqüenciamento da região D1/D2 da subunidade maior do rDNA. Muitas leveduras encontradas são de prováveis novas espécies ou novos biotipos de espécies conhecidas. As leveduras prevalentes no lago foram Candida guilliermondii ou linhagem similar de Candida famata que foram seletivamente favorecidas pelo meio BIL-galactose cicloeximida. O meio BIL-etanol favoreceu Candida krusei e outras espécies anamorfas de Pichia, que foram mais frequentes nos pontos de maior poluição doméstica. Os meios BIL glicose-cicloeximida e BIL verde-bromocresol favoreceram o isolamento de maior diversidade de espécies. A alta frequência de ascomycetes isolados neste estudo foi consistente com sua associação a águas de ambientes poluídos por matéria orgânica. Um aumento na frequência de basidiomycetes observado depois das chuvas, pode ter sido relacionado à influência do run-off. O isolamento das espécies relacionadas a diferentes tipos de poluição sugere o uso destes meios no estudo de leveduras como indicador de eutroficação por fontes diversas, tais como as atividades agrícolas e o lançamento de efluentes domésticos.