Obtenção de anticorpos monoclonais anti-PBP2a de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina através do cultivo de células de hibridomas em frasco do tipo spinner

Abstract

Hidridoma é uma linhagem celular produzida em laboratório a partir da fusão de células linfóides produtoras de anticorpo com células cancerígenas não produtoras. São capazes de se proliferar e produzir anticorpos monoclonais específicos de forma contínua. Anticorpos monoclonais são glicoproteínas de alto valor agregado, indicados para uso terapêutico e diagnóstico, e seu uso tem sido proposto para tratamento de infecções bacterianas resistentes a múltiplas drogas, tais como Staphylococcus aureus Resistente à Meticilina (MRSA), que atualmente são responsáveis por causar 29% das infecções hospitalares no Brasil. O objetivo deste trabalho foi investigar os fatores que podem influenciar na obtenção de anticorpos monoclonais em cultura de células de hibridoma murino anti-PBP2a, em frasco tipo spinner, secretoras de anticorpo monoclonal anti-PBP2a, que confere resistência aos Staphylococcus aureus. Os efeitos da variação da concentração do inóculo celular inicial e da velocidade de agitação sobre o crescimento celular e a obtenção de anticorpo monoclonal anti-PBP2a de MRSA (Mab-PBP2a) foram avaliados através do planejamento fatorial completo 22, enquanto a taxa de produção de anticorpo monoclonal específico foi avaliada por um plano fatorial completo 23 Foi verificada uma tendência de aumento da concentração de Mab-PBP2a com o uso de maior concentração do inóculo celular inicial e velocidade de agitação e uma redução na taxa específica de produção anticorpo monoclonal anti-PBP2a de MRSA foi verificada. A velocidade de agitação foi a variável que apresentou maior influência sobre a concentração máxima de células, secreção de Mab-PBP2ae taxa específica de produção de anticorpo monoclonal. Quando as células de hibridoma secretoras do anticorpo monoclonal anti-PBP2a de MRSA foram cultivadas em um frasco do tipo spinner com eixo fixo agitação e concentração celular inicial de 1,3 x105células viáveis/mL a 112rpm, não foi observado efeito negativo sobre a concentração do Mab-PBP2a, ao final do segundo dia de cultivo, sendo obtida uma concentração de 34\03BCg/mL. Foi observado que a concentração do inóculo celular inicial pode ser reduzida, devendo ser considerada a concentração de anticorpo monoclonal secretado e um adequado cultivo celular de hibridomas sem prejuízos na secreção do anticorpo monoclonal anti-PBP2a de MRSA.