Desempenho de métodos laboratoriais no diagnóstico de infecções fúngicas pulmonares em pacientes do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas

Abstract

Infecções pulmonares são geralmente comuns em hospedeiros imunocomprometidos. Entre as infecções pulmonares, pneumocistose, histoplasmose e criptococose são as mais importantes infecções fúngicas na população imunocomprometida, especialmente quando a contagem de células TCD4+ está abaixo de 200 células/m3. Pneumonias fúngicas podem ser fulminantes e o diagnóstico dessas infecções pode ser difícil. O diagnóstico definitivo necessita de evidências microbiológicas ou histopatológicas, mas em alguns fungos, a cultura é demorada e pode levar de 2 a 4 semanas para se obter um resultado positivo, atrasando a decisão clínica. No diagnóstico convencional, baseado no exame direto, cultura, histopatologia ou imunocitoquímica, estes fungos são frequentemente confundidos com outros microrganismos e o diagnóstico diferencial é necessário. Métodos moleculares podem oferecer uma contribuição muito importante para o diagnóstico porque os resultados são rápidos. O objetivo principal desse trabalho foi comparar o rendimento de métodos convencionais e métodos moleculares para diagnóstico, como cultura, imunofluorescência direta, imunocitoquímica, calcofluor, Grocott e nested PCR para detectar sequencia parcial específica de Histoplasma capsulatum e Pneumocystis jirovecii e qPCR Multiplex para detectar simultaneamente sequencias de P. jirovecii, H. capsulatum e Cryptococcus neoformans Foram analisadas 40 amostras respiratórias de indivíduos imunocomprometidos, como escarro induzido (n = 22), lavado traqueal (n = 10), lavado broncoalveolar (n = 5) e escarro espontâneo (n= 3). Comparando os resultados obtidos por essas diferentes metodologias, os métodos convencionais não se mostraram satisfatórios, não apresentando resultados positivos no calcofluor e na imunocitoquímica, somente dois resultados positivos para C. neoformans na cultura, duas amostras positivas para H. capsulatum na coloração pelo Grocott e seis amostras positivas para P. jirovecii na imunofluorescência direta. Utilizando a metodologia molecular qPCR multiplex, duas amostras foram positivas para C. neoformans, uma positiva para P. jirovecii e 11 para H. capsulatum. A nested PCR mostrou o melhor desempenho, detectando 12 amostras positivas para P. jirovecii e 28 positivas para H. capsulatum e demonstrou nove casos clínicos de coinfecção por esses fungos mostrando a importância do uso de diversas ferramentas diagnósticas para investigar a presença de possíveis agentes fúngicos. Os resultados do presente estudo foram similares aos descritos na literatura. A nested PCR foi o melhor método para detectar P. jirovecii nas amostras respiratórias e uma boa ferramenta para detectar H. capsulatum em espécimes clínicos humanos, assim como, apresentou alta sensibilidade quando comparada com métodos tradicionais