Papel do repressor transcricional rv3405c na vida intracelular do Mycobacterium bovis BCG Moreau

Abstract

Mycobacterium bovis BCG é a única vacina disponível na prevenção da tuberculose, doença infecciosa causada pelo M. tuberculosis e responsável por 1,8 milhão de mortes em 2015. \201CBCG\201D é uma família de cepas geneticamente distintas pela perda de diferentes regiões genômicas (RD), além de outros tipos de mutações como inserções/deleções e SNPs. BCG Moreau, cepa usada no Brasil, perdeu a região genômica RD16, levando ao truncamento do gene que codifica o regulador transcricional Rv3405c, que regula negativamente a expressão de Rv3406, uma alquil sulfatase. Para avaliar o impacto da perda da rv3405c, uma cepa de BCG Moreau carreando apenas o vetor (M\F04405c) e uma cepa complementada (M::05c) foram usadas para infectar macrófagos humanos da linhagem THP-1, para avaliar: a viabilidade das cepas recombinantes, o padrão de citocinas secretadas (TNF-\03B1, MIP-1\F062, IL-1\F062, IL-6 e IL-8) e a viabilidade das células hospedeiras. Células THP-1 foram diferenciadas em macrófagos e infectadas com MOI de 1 e 10 (bactéria:célula). Todas as variáveis foram analisadas em tempos determinados de 6, 24, 48, 72 e 96 horas após a infecção. Nossos resultados demonstram que a viabilidade de M\F04405c é maior do que M::05c tanto em meio axênico quanto no ambiente intracelular, sugerindo um possível ganho funcional associado à expressão constitutiva de Rv3406 Por outro lado, a viabilidade das células hospedeiras não apresenta diferenças significativas quando infectadas pelas cepas recombinantes. Observamos diferenças relativas ao perfil de secreção das citocinas em alguns tempos de infecção analisados, normalmente mais elevado nas células infectadas por M\F04405c, exceto para IL-6, cuja secreção foi maior em células infectadas pela cepa complementada. Nossos resultados também mostraram que o gene rv0405 possui uma região com maior identidade com motivo palindrômico identificado como possível lócus de ligação para o fator transcricional Rv3405c. Com relação à análise da expressão gênica, nossos dados preliminares mostram que não houve diferença na expressão dos alvos analisados (rv0405, rv0667, rv1116 e rv3616c) entre as cepas recombinantes e que a presença da proteína Rv3406 não foi detectada na cepa complementada. Este trabalho contribui para elucidar o impacto da deleção genômica RD16 na fisiologia da cepa vacinal brasileira, BCG Moreau