Please use this identifier to cite or link to this item: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/32107
Full metadata record
DC FieldValue
dc.contributor.advisorDallagiovanna, Bruno
dc.contributor.authorCunha, Camila Sayuri Tominaga da
dc.date.accessioned2019-03-15T13:57:32Z
dc.date.available2019-03-15T13:57:32Z
dc.date.issued2018
dc.identifier.citationCUNHA, Camila Sayuri Tominaga da. Caracterização molecular dos seis homólogos do fator de início de tradução eIF4E de Trypanosoma cruzi. 2018. 66 f. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia) - Instituto Carlos Chagas, Fundação Oswaldo Cruz, Curitiba, 2018.
dc.identifier.urihttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/32107
dc.description.abstractNos tripanosomatídeos diferentes linhas de evidências indicam que a regulação da expressão gênica ocorre majoritariamente por mecanismos pós-transcricionais, sendo a biossíntese de proteínas, ou tradução, considerada uma etapa crítica para esta regulação. A etapa de iniciação da tradução é, sem dúvida, a mais complexa dentre todo o processo e a mais sujeita a mecanismos de regulação. Dentre as proteínas desenvolvidas no início da tradução, destaca-se o complexo eIF4F, formado pelas proteínas eIF4A, eIF4E e eIF4G. eIF4E parece ser o fator de início limitante e alvo de regulação na maioria dos eucariotos estudados e desta forma, presume-se que a formação de eIF4F é, em grande parte, regulada pela disponibilidade de eIF4E. Em tripanosomatídeos foi observada a ocorrência de múltiplos homólogos para as subunidades eIF4E e eIF4G, entretanto, esta multiplicidade de homólogos não é observada em outros eucariotos unicelulares, como por exemplo em leveduras. Embora existam estudos a cerca destes múltiplos homólogos em T. brucei e Leishmania, até o momento nenhuma função específica para cada homólogo foi caracterizada em T. cruzi, nem tampouco, foi descrito se há redundância em suas funções. Sendo assim, o objetivo desse trabalho é iniciar a caracterização molecular dos seis homólogos do fator de início de tradução eIF4E (eIF4E1-6) de T. cruzi. Para isto, foram produzidos anticorpos policlonais específicos para cada um dos homólogos de TceIF4E. Por ensaios de Western blotting foi visto que a expressão de todos os homólogos é regulada durante a metaciclogênese. Ensaios de imunofluorescência indireta mostraram que TceIF4E1-6 possuem localização citoplasmática no parasito. Além disso, a associação de TceIF4E1-6 com polissomos foi verificada através do fracionamento de extratos de parasitos tratados com cicloheximida e puromicina em gradientes de sacarose, e sugerem funções distintas destes homólogos no processo de tradução. Os resultados obtidos poderão definir se estes fatores estão associados a mecanismos de regulação gênica únicos dos tripanossomatídeos, não encontrados nos demais eucariotos, que possam no futuro contribuir para a produção de quimioterápicos, capazes de inibir especificamente a síntese proteica destes parasitos.
dc.language.isopor
dc.rightsopen access
dc.subject.otherTradução
dc.subject.otherTrypanosoma Cruzi
dc.titleCaracterização molecular dos seis homólogos do fator de início de tradução eIF4E de Trypanosoma cruzi
dc.typeDissertation
dc.degree.date2018
dc.degree.grantorFundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas
dc.degree.levelMestrado Acadêmico
dc.degree.localCuritiba
dc.degree.programPrograma de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia
dc.contributor.advisorcoHoletz, Fabíola Barbieri
dc.description.abstractenIn trypanosomatids different lines of evidence indicate that the regulation of gene expression occurs mainly by post-transcriptional mechanisms and protein biosynthesis, or translation, is considered a critical step for this regulation. Translation initiation is a key step for the gene expression control and involves several translation initiation factors (eIFs). Among those factors is eIF4E, a subunit of the eIF4F complex that also includes eIF4G and eIF4A. The eIF4E factor appears to be the limiting start and a target factor in most eukaryotes. In this way, formation of eIF4F is presumed to be largely regulated by the availability of eIF4E. In trypanosomatids 6 eIF4E and 5 eIF4G homologues were identified, and multiple homologues have not been described in others unicellular eukaryotes, such as yeasts. Despite many studies of these multiple homologues have been described in T. brucei and Leishmania, little is known about these factors in T. cruzi and no specific function for each homologue has been characterized or have been described if there is redundancy in its functions. Thus, the aim of our study is to start the molecular characterization of the eIF4E factors in T. cruzi. Specific polyclonal antibodies against the six TceIF4E homologues were produced and the analysis by Western blotting of TceIF4E1-6 expression levels have shown that all homologs are regulated during metacyclogenesis. Immunofluorescence assays of wild type parasites indicated that all eIF4E homologues have a cytoplasmic localization in replicative forms of T. cruzi. In addition, the association of TceIF4E1-6 with polysomes was verified by the fractionation of extracts of mutant parasites treated with cycloheximide and puromycin in sucrose gradients, and the results obtained suggest different functions of these homologues in the translation process. Altogether, these approaches will provide new insights into the role of each TceIF4E protein in the translational control of gene expression in T. cruzi and define if these factors are associated to unique mechanisms of gene regulation of trypanosomatids, not found in other eukaryotes, which may in the future contribute to the production of chemotherapeutic agents, capable of specifically inhibiting the protein synthesis of these parasites.
dc.creator.affilliationFundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.
dc.subject.enParasitology
dc.subject.enGene Expression Regulation
dc.subject.esParasitología
dc.subject.esRegulación de la Expresión Génica
dc.subject.decsParasitologia
dc.subject.decsRegulação da Expressão Gênica
Appears in Collections:PR - ICC - Dissertações de Mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Dissert_CamilaCunha.pdf11.17 MBAdobe PDFView/Open


FacebookTwitterDeliciousLinkedInGoogle BookmarksBibTex Format mendeley Endnote DiggMySpace

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.