Produção de uma proteína recombinante do ovo de Schistosoma mansoni e avaliação de desempenho pelo imunoensaio de ELISA indireta empregando amostras sorológicas humana

Abstract

A esquistossomose ainda é considerada um problema de saúde pública mundial. O avanço integrado das ações de controle nos últimos anos resultou na diminuição da morbidade e consequentemente no aumento de áreas de baixa endemicidade (caracterizada por indivíduos eliminando <00 ovos por gramas de fezes - opg). O diagnóstico padronizado pela Organização Mundial de Saúde (OMS) é o teste parasitológico de Kato-Katz (K-K) o qual é baseado na detecção de ovos nas fezes. Embora seja o método de certeza na identificação dos casos, o mesmo apresenta baixa sensibilidade quando a eliminação de ovos pelos indivíduos nas fezes é baixa. Além disso, o mesmo não é aplicável à fase que antecede a oviposição (pré-patente). O teste imunocromatográfico POC-CCA® está comercialmente disponível e tem sido avaliado em diferentes áreas da África e Brasil. Esse teste possui vantagens por ser um teste rápido e acessível à área de campo, entretanto resultados divergentes tem sido encontrados no Brasil. Visando a disponibilidade de mais alternativas de diagnóstico para a doença, este trabalho propôs a seleção de antígenos do extrato solúvel do ovo (SEA) de Schistosoma mansoni através da análise imunoproteômica. Embora o SEA seja um dos antígenos brutos mais empregados nos imunoensaios, o fracionamento do mesmo na busca de marcadores de diagnóstico ainda é escassa. Neste estudo, 23 spots foram imunorreativos ao soro de indivíduos positivos para S. mansoni. Destes, 22 foram também reconhecidos por amostras de indivíduos infectados por outros helmintos e 10 spots por amostras de indivíduos negativos. Apenas um spot, identificado como Major Egg Antigen (MEA), foi exclusivamente reconhecido pelas amostras de indivíduos postivos para S. mansoni. MEA recombinante (MEAr) foi produzida em sistema heterólogo de bactérias e manteve a antigenicidade após a purificação. A detecção de anticorpos por ELISA (IgG-ELISA-MEAr) foi empregada utilizando amostras positivas de área endêmica e amostras negativas de área não endêmica (controle). IgG-ELISA-MEAr determinou uma área sob a curva (ASC) de 0,94 sem diferença significativa com IgG-ELISA-SEA (ASC = 0,94) e IgG-ELISA-SWAP (ASC = 0,96). Com uma sensibilidade de 87,10% e especificidade de 84,62%, o teste foi capaz de identificar 87,5% (56/64) indivíduos com cargas ≤ 10 opg dos quais 27 apresentavam 1 opg. IgG-ELISA-MEAr apresentou Kappa = 0,71 (substantial agreement) sem diferença significativa (p > 0,05) em relação ao método de referência (K-K 18/24L). Concluída a padronização, o teste foi avaliado na discriminação de indivíduos positivos e negativos residentes de áreas endêmicas. Assim como IgG-ELISA-SEA e IgG-ELISA-SWAP, IgG-ELISA-MEAr demonstrou baixa especificidade (< 50%) nessa análise. Em indivíduos de fase aguda infectados através do primeiro contato com uma área de transmissão, IgG-ELISA-MEAr determinou uma sensibilidade de 89,8%. Embora a técnica de IgG-ELISA-MEAr não tenha sido superior aos antígenos brutos, deve-se levar em conta a disponibilidade da produção em larga escala dos antígenos e combinantes, difícil de ser alcançada pelos antígenos brutos devido a infraestrutura necessária para manutenção do ciclo biológico de S. mansoni. Os dados apresentados neste trabalho poderão contribuir para o aperfeiçoamento de estratégias de controle da esquistossomose em áreas de baixa prevalência assim como abrir perspectivas para o desenvolvimento de técnicas que envolvam a detecção direta de MEAr através da produção de anticorpos monoclonais.