Correlação do fenótipo de resistência do Trypanosoma cruzi a drogas com o mecanismo de escape à ação antimicrobiana do IFN-y em fibroblastos humanos

Abstract

Os maiores problemas da quimioterapia da doença de Chagas são a baixa eficácia e alta do nifurtimox e benzonidazol (BZ) sua toxici dade e a existência de cepas naturalmente resistentes. Neste trabalho investigamos se o fenótipo de resistência a drogas de populações de Trypanosoma cruzi poderia estar relacionado com a inibição da resposta mediada pelo Interferon-gamma (IFN- γ ), a principal citocina envolvida nas respostas imunológicas contra infecções virais e parasitárias. Em fibroblastos humanos, o efeito antimicrobiano exercido pelo IFN γ é a degradação do aminoácido essencial triptofano através da indução da indoleamina-2,3dioxigenas e (IDO). A via de sinalização do IFN- γ é regulada por proteínas tirosina-fosfatases (PTPs) e pelos fatores reguladores de IFN (IRFs) que se ligam a sítios de ligação nos promotores de muitos genes induzidos por IFN- γ (ISGs). Neste estudo foram utilizadas populações da cepa Y de T. cruzi com resistência selecionada in vivo ao BZ (BZR) que se mostraram duas vezes mais resistentes do que seu par sensível (BZS) em nosso ensaio de susceptibilidade ao BZ (IC 50 ) in vitro. Para investigarmos os possíveis mecanismos utilizados por estas populações para bloquear a resposta mediada pelo IFN- γ , nós avaliamos através de RT-PCR quantitativo em tempo real (qPCR) a expressão do mRNA dos genes que codificam a IDO, os fatores IRF-1 e IRF-2 em fibroblastos humanos 2C4 infectados com estas populações e estimulados com rINF- γ . Nossos resultados mostraram que a infecção com parasitos sensíveis causou uma redução da expressão do mRNA da IDO. Entretanto, a infecção das células com parasitos resistentes causou não somente uma redução na expressão do mRNA da IDO, mas também do IRF-1 e um aumento da expressão do mRNA do IRF-2. A estimulação com rIFN- γ dos fibroblastos infectados com as populações BZS ou BZR não causou alterações na expressão da TcPTP. Nossos resultados mostram que parasitos resistentes possuem um maior potencial evasivo à resposta mediada pelo rIFN- γ comparado com os parasitos sensíveis, sugerindo uma correlação entre o fenótipo de resistência de T. cruzi a drogas e o mecanismo de escape do parasito à ação antimicrobiana induzida por esta citocina.