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AVALIAÇÃO E VALIDAÇÃO DE PROTEÍNAS QUIMÉRICAS DO TRYPONOSOMA CRUZI NO DIAGNÓSTICO DA DOENÇA DE CHAGAS EM CÃES, BRASIL
Leony, Leonardo Maia | Data do documento:
2019
Autor(es)
Orientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.
Resumo
Os cães domésticos são considerados animais sentinela e reservatórios para doença de Chagas (DC), devido ao seu papel na manutenção do ciclo de transmissão em ambientes domésticos e sua correlação com a prevalência da DC humana. O ELISA indireto é geralmente a metodologia escolhida para o diagnóstico, no entanto, seu desempenho depende substancialmente dos antígenos empregados. Uma estratégia para ultrapassar esta limitação é utilizando antígenos quiméricos, compostos por sequências peptídicas antigênicas, imunodominantes, conservadas e repetitivas de múltiplas proteínas do parasita. Por isto, o nosso grupo desenvolveu quatro antígenos quiméricos (IBMP-8.1, 8.2, 8.3 e 8.4), seu potencial diagnóstico foi avaliado para o diagnóstico da DC humana, no qual os antígenos quiméricos apresentaram um desempenho diagnóstico superior em comparação aos dos testes comercialmente disponíveis no Brasil, Espanha e Argentina. OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade sorodiagnóstica dos antígenos IBMP frente às amostras de cães naturalmente e experimentalmente infectados com Trypanosoma cruzi. MATERIAIS E MÉTODOS: Os ensaios foram otimizados por checkerboard titration. Posteriormente, o potencial diagnóstico foi validado através de curvas ROC e o desempenho dos testes foi determinado utilizando tabelas de dupla entrada. A reatividade cruzada também foi avaliada para babesiose, erliquiose, dirofilariose, anaplasmose e leishmaniose. RESULTADOS: Todos os antígenos quiméricos demonstraram um alto desempenho diagnóstico, especialmente o IBMP-8.3 e IBMP-8.4. O antígeno IBMP-8.3 demonstrou uma sensibilidade de 100%, seguido pelo IBMP-8.4 (96.7% - 100%), IBMP-8.2 (73.3% - 87.5%) e IBMP-8.1 (50% - 100%). As especificidades mais elevadas dos antígenos foram para o IBMP-8.2 (100%) e IBMP-8.4 (100%), seguido por IBMP-8.3 (96.7% - 97.5%) e IBMP 8.1 (89.1% -100%). CONCLUSÕES: Portanto, o uso de antígenos quiméricos em imunoensaios para diagnosticar a DC em cães é uma ferramenta promissora para fins veterinários e epidemiológicos. O uso de antígenos quiméricos apresentou uma maior resistência à problemas comuns observados no diagnóstico sorológico de DC, especialmente em relação à variação dos parâmetros de eficiência de acordo com a cepa do parasita e reatividade cruzada com outras doenças parasitárias.
Resumo em Inglês
Dogs are considered a sentinel group for Chagas disease, due to their role in maintaining the transmission cycle in domestic environments and their correlation with humans’ Chagas prevalence. ELISA is the generally chosen methodology for diagnosis, however, its performance depends substantially on the employed antigenic matrix. A strategy to overcome this limitation is by utilizing chimeric antigens, consisting of antigenic, immunodominant, conserved and repeating amino acid sequences of the parasite. As such, our group developed four chimeric antigens (IBMP-8.1, 8.2, 8.3 and 8.4) and their diagnostic potential was previously evaluated for human’s diagnosis, in which the chimeric antigens presented a superior diagnostic performance compared to commercially available tests in Brazil, Spain, and Argentina. OBJECTIVE: This study aimed to evaluate the potential diagnostic ability of these antigenic proteins for Trypanosoma cruzi infection in dogs. MATERIALS AND METHODS: The assays were optimized by checkerboard titration. Subsequently, the diagnostic potential was validated through ROC curves and the tests performance was determined using double entry tables. Cross-reactivity was also evaluated for babesiosis, ehrlichiosis, dirofilariasis, anaplasmosis and leishmaniasis. RESULTS: All chimeric antigens demonstrated a high diagnostic performance, especially IBMP-8.3 and IBMP-8.4. IBMP-8.3 antigen demonstrated a 100% sensitivity, followed by IBMP-8.4 (96.7% - 100%), IBMP-8.2 (73.3% - 87.5%), and IBMP-8.1 (50% - 100%). The highest specificities of the antigens were for IBMP-8.2 (100%) and IBMP-8.4 (100%), followed by IBMP-8.3 (96.7% - 97.5%) and IBMP 8.1 (89.1%-100%). CONCLUSIONS AND STUDY CONTRIBUTIONS: Therefore, the use of chimeric antigenic matrices in immunoassays to diagnose CD in dogs is a highly promising tool for veterinary and epidemiological purposes. The use of chimeric antigens also efficiently addressed the common hurdles seen in CD serodiagnosis, especially regarding variation in efficiency parameters according to parasite’s strain and cross-reactivity with other infectious diseases.
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