Dípteros muscoides como veiculadores de bactérias resistentes aos antimicrobianos

Abstract

Dípteros muscoides desempenham papel significante na disseminação de microrganismos. O principal objetivo deste estudo foi isolar bactérias resistentes aos antimicrobianos, a partir de dípteros muscoides, coletados em 5 pontos diferentes: no entorno e no lixo de um hospital municipal, na Zona Norte do Rio de Janeiro, assim como na Fiocruz e Quinta da Boa Vista, Rio de Janeiro. As moscas foram capturadas utilizando armadilhas de garrafa pet contendo isca atrativa, levadas ao Laboratório de Entomologioa Médica e Forense, IOC/Fiocruz, e identificadas utilizando chaves dicotômicas. Após esse procedimento foram maceradas em salina 0,85% estéril. Este extrato foi diluído e plaqueado em diferentes meios de cultura, contendo ou não antibiótico (ceftriaxona e polimixina, a 1 mg/L e 8 mg/L, respectivamente). Foram realizados o isolamento, a purificação das colônias e o teste de sensibilidade aos antimicrobianos (TSA) por disco difusão, utilizando os antibióticos cefepime, ceftazidima, cefoxitina, meropenem, gentamicina, tetraciclina e ciprofloxacina, cloranfenicol e trimetoprimsulfametoxazol (Sensifar). Foram realizadas 16 coletas, e um total de 197 isolados bacterianos foram obtidos a partir dos 117 dipteros muscoides. Os isolados foram identificados por sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e por MALDITOF-MS (Brucker). Do total, 46 isolados apresentaram perfil de não sensibilidade (perfil resistente e intermediário) a pelo menos dois antimicrobianos diferentes, enquanto dez isolados foram classificados como multirresistentes. Análise de cluster feita pelo programa Statistica revelou diferença significativa entre o Ponto 5 e os demais pontos, quanto ao número de isolados não sensíveis. Setenta e três amostras foram submetidas para detecção de genes de resistência aos β-lactâmicos, aminoglicosídeos e colistina, através de PCR. Destas, apenas sete foram positivas. Três cepas de importância foram encontradas: Raoultella ornithinolytica positiva para o gene blaKPC˗₂, e para os principais elementos do transposon Tn4401, além dos grupos de incompatibilidade plasmideal IncK; Escherichia coli positiva para o gene blaNDM˗₁, Inc A/C, a partir da qual foram obtidas transconjugantes utilizando E. coli J53 como receptora e K. pneumoniae positiva para blaNDM˗₁ e grupo IncY. Todas as três cepas foram aac(6')-Ib e Int1 (integron de classe 1) positivas. O sequenciamento total da cepa 23 (K. pneumoniae ST 3997 blaNDM˗₁ positiva) revelou a presença de diversos genes de resistências. A não hibridização com sonda específica e não obtenção de transconjugantes sugerem a presença cromossomal de blaNDM˗₁. Através da técnica de PFGE, analisamos o perfil genético dos isolados de origem clínica (urinocultura e hemocultura) e os isolados obtidos a partir de mosca, pertencentes à espécie K. pneumoniae, porém não foi detectado o mesmo clone nos dois ambientes. Nesse sentido, destaca-se a importância das moscas na disseminação (e reservatórios) de bactérias resistentes aos antimicrobianos.