Avaliação de inibidores de enzimas envolvidas no Metabolismo Redox para o tratamento da leishmaniose cutânea

Abstract

INTRODUÇÃO: No Brasil, a leishmaniose cutânea localizada (LCL) é ocasionada principalmente pela Leishmania braziliensis. Para o tratamento da LCL, os medicamentos de escolha são os antimoniais pentavalentes (Sbv), Anfotericina B ou Pentamidina, entretanto, o tratamento com esses medicamentos apresenta limitações tais como toxicidade, custo e/ou duração do tratamento, além do crescente registro de casos de resistência. Assim, é urgente o desenvolvimento de novos compostos anti-leishmania. Entre esses novos compostos, estão os inibidores de enzimas envolvidas no metabolismo redox de tripanossomatídeos tais como a tripanotiona sintetase (TryS), qual está presente unicamente em tripanossomatídeos. Estudos prévios mostraram que a inibição da TryS diminui a proliferação de parasitas do gênero Trypanosoma e aumenta a sensibilidade dos parasitos ao peróxido de hidrogênio. OBJETIVO: Então, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial terapêutico de inibidores da TryS na infecção de L. braziliensis in vitro e in vivo. MATERIAL E MÉTODOS E RESULTADOS: Experimentos in vitro com Paullones, uma classe de inibidores de proteínas cinases, mostraram a capacidade desses compostos de inibir a atividade de TryS sob a forma recombinante e de diminuir a infecção de macrófagos por L. braziliensis. Dos 16 Paullones testados, cinco diminuíram a infecção de maneira significativa. O Paullone KuRK259 foi o composto mais promissor, apresentando EC50 de 1,19μM e índice de seletividade de 20 quando testado contra amastigotas intracelulares. O tratamento in vitro com KuRK259 induziu alterações ultraestruturais nos amastigotas, mas não elevou a produção de citocinas, NO ou ROS em macrófagos infectados. O efeito on target foi avaliado pela quantificação de tióis de baixo peso molecular e por meio de uma linhagem transgênica, a qual expressa uma proteína repórter sensível a mudanças no metabolismo redox. A análise dos níveis de tióis mostrou um acúmulo de glutationa após o tratamento com KuRK259 e uma menor quantidade de tripanotiona tanto em promastigotas quanto em amastigotas. Além disso, também observamos um meio intracelular oxidativo na linhagem transgênica tratada com KuRK259. Por fim, empregando um modelo pré-clínico de LCL causado por L. braziliensis, observamos que o tratamento in vivo com KuRK259 inibiu o desenvolvimento da lesão, mas não diminuiu a carga parasitária. O tratamento também inibiu a produção das citocinas TNF, IFN-γ e IL-10 na 6ª semana de infecção e aumentou a produção de IFN-γ e IL-6 na 10ª semana. CONCLUSÕES: Esses resultados indicam que o KuRK259 é capaz de inibir a atividade da TryS e de modular a infecção in vitro, bem como interferir no curso da doença in vivo, reforçando a TryS como alvo para o desenvolvimento de novos fármacos.