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AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE EM CAMUNDONGOS UTILIZANDO DIFERENTES PROTOCOLOS DE IMUNIZAÇÃO COM ANTÍGENOS RECOMBINANTES DE LEISHMANIA CHAGASI
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Resumen en portugues
A leishmaniose visceral é uma doença parasitária causada por Leishmania chagasi. Os cães
são considerados como principais reservatórios do parasito. Uma vacina efetiva para o cão
pode contribuir para o controle da LV tanto no homem como no cão. Em um estudo prévio,
antígenos recombinantes, obtidos a partir de uma biblioteca de cDNA da forma amastigota de
Leishmania chagasi, foram selecionados a fim de serem avaliados como candidatos a
componente de uma vacina contra leishmaniose visceral canina. No presente trabalho, a
resposta imune humoral e celular de camundongos foi avaliada após injeção de alguns desses
antígenos recombinantes, em cinco diferentes protocolos de imunização. Grupos de
camundongos BALB/c foram injetados com as proteínas rLci4A-NH6 ou rLci2B-NH6,
isoladamente ou associadas aos adjuvantes saponina, ODN 1826 ou diferentes doses de um
plasmídeo codificando IL-12 murina. Além disso, animais foram sensibilizados com
plasmídeo codificando Lci2B e receberam reforço com a proteína rLci2B-NH6 associada à
saponina. Por último, os animais foram injetados com plasmídeos codificando novos
antígenos, Lci2-NT-5R-CT ou Lci2-NT-CT, e recebram reforço com as respectivas proteínas
recombinantes rLci2-NT-5R-CT-NH6 ou rLci2-NT-CT-NH6 associadas à saponina. Nesse
último protocolo, os plasmídeos utilizados continham o gene para uma proteína
transmembrana associada a lisossomos, LAMP, visando à produção in vivo de quimeras de
dos antígenos de Leishmania com LAMP, a fim de direcionar a apresentação dos peptídeos
para linfócitos T CD4+ via moléculas de MHC-II. Em um dos protocolos, os animais foram
desafiados com 1 x 107 Leishmanias para avaliação da carga parasitária no baço após
imunização. Os resultados encontrados mostraram que animais que receberam rLci4A-NH6,
isoladamente ou com diferentes doses de plasmídeo codificando IL-12, apresentaram níveis
signficantes de IgG e IgG1, ao passo que o uso do antígeno com os adjuvantes saponina ou
ODN 1826 induziu a produção de IgG, IgG2a e IgG1, além de produção de IL-5 pelo grupo
que recebeu saponina. Animais que receberam rLci2B-NH6, isoladamente ou associado aos
plasmídeos contendo inserto de IL-12, produziram IgG e IgG1 antígeno específicos e
falharam também na produção de citocinas e proliferação celular. A utilização de saponina
com esse antígeno induziu produção de IgG, IgG2a e IgG1, assim como de IFN-γ. Já o uso de
ODN 1826, induziu a produção de IgG e IgG1, favoreceu a produção de IgG2a, mas falhou na
indução de resposta imune celular significante. Por outro lado, animais que receberam
plasmídeo codificando Lci2B e reforço com a proteína associada à saponina apresentaram
uma resposta imune com predominância de anticorpos IgG2a e produção de IFN-γ por
alguns animais, a qual não conferiu proteção contra infecção pelo parasito. Por fim, a
utilização de quimeras de LAMP/Lci2-NT-5R-CT ou LAMP/Lci2-5R-CT induziu uma fraca
resposta imune humoral, com produção de IgG, IgG1 e IgG2a por alguns animais. No entanto,
a utilização da quimera LAMP/Lci2-NT-CT induziu proliferação celular e tendência a
produção de IFN-γ. Em conclusão, nenhum dos cinco protocolos utilizados foi capaz de
induzir uma resposta imune específica predominantemente celular do tipo Th1 ou capaz de
conferir proteção contra infecção dos animais.
Resumen en ingles
Visceral leishmaniasis is a disease caused by Leishmania chagasi. Dogs are the main
reservoir of the parasite. A canine vaccine may contribute to the desease control in humans
and dogs. In a previous study, recombinant antigens were selected from a cDNA library of
Leishmania chagasi amastigotes in order to be evaluated as components of a vaccine against
canine visceral leishmaniasis. In this study, five immunization protocols were assessed in
mice with some of these antigens. BALB/c mice were injected with either rLci4A-NH6 or
rLci2B-NH6 proteins, associated or not with the adjuvants saponin, ODN 1826 and different
doses of a plasmid encoding murine IL-12 (pIL-12). Moreover, animals were primed with a
plasmid encoding Lci2B (pLci2B) and boosted with rLci2B combined with saponin. Finally,
all mice were primed with new antigens, Lci2-NT-5R-CT or Lci2-NT-CT, and they were
boosted with the following recombinant proteins rLci2-NT-5R-CT-NH6 or rLci2-NT-CTNH6
associated with saponin. In this late experiment, the used plasmids had an insert of a
lisossome associated membrane protein, LAMP, to produce in vivo chimeras composed of
LAMP with the antigens and to direct the presentation of the peptides to CD4+ T cell through
MHC-II molecules. The humoral immune response was assessed by antibodies production
(IgG, IgG1 and IgG2a) in animal serum samples and the cellular immune response by cellular
proliferation and cytokine production (IFN-γ and IL-5). The results showed that animals that
were injected with rLci4A-NH6 alone or combined with pIL-12 generated IgG and IgG1
specific antibodies, while others that received saponin and ODN 1826 as adjuvants produced
IgG, IgG2a and IgG1. Furthermore, IL-5 was detected in rLci4A-NH6/saponin group, but
only in one of two experiments. Animals that were injected with rLci2B-NH6, alone or
associated with pIL-12, presented IgG and IgG1 antibodies but no cellular immune response.
The saponin used as adjuvant induced IgG, IgG2a and IgG1 antibodies, as well as IFN-γ. The
use of ODN 1826 induced IgG and IgG1, and favored IgG2a production, but failed in
inducing IFN-γ. On the other hand, animals that were primed with pLci2B and boosted with
the protein associated with saponin produced IgG IgG1 and more intensively IgG2a, and only
some animals produced IFN-γ. Nevertheless, such immune response did not protect the
animals against the parasite infection. At last, LAMP/Lci2-NT-5R-CT or LAMP/Lci2-5R-CT
chimeras induced a weak humoral immune response, in which IgG, IgG1 and IgG2a
antibodies were detected in only a few animals. However, mice that were injected with
LAMP/Lci2-NT-CT presented cellular proliferation and some animals produced IFN-γ. In
conclusion, in spite of the fact that the antigens are immunogenic in a murine model, none of
the used protocols elicited an intense Th1 cellular immune response or a protective one.
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