Identificação e caracterização de marcadores microssatélites de Pansatrongylus megistus (Burmeister, 1835) (Triatominae: Reduviidae)

Abstract

Os triatomineos sao insetos hematofagos vetores do Trypanosoma cruzi, o agente etiologico da doenca de Chagas. Atualmente sao descritas 152 especies de triatomineos sendo 65 autoctones do Brasil, entre essas especies o Panstrongylus megistus e considerado o de maior importancia epidemiologia no Sudeste do Brasil devido a sua ampla distribuicao geografica alta capacidade de colonizacao, alta antropofilia e altos niveis de infeccao natural. A permanencia deste vetor no ambiente artificial (casas e anexos) tem sido um desafio para o controle da doenca de Chagas (DCh), nao existindo nenhuma evidencia da origem dos processos de (re)infestacao dos domicilios, se esta ocorre a partir de focos externos e/ou residuais, colocando sob risco as populacoes rurais em sua area de ocorrencia. A genetica de populacoes e uma importante ferramenta para estimar a dinamica entre habitats, podendo auxiliar na compreensao da ecoepidemiologia da DCh. Estudos ja realizados com outras especies de triatomineos demonstraram que marcadores microssatelites sao capazes de revelar o fluxo genico em escala microgeografica. No entanto tais marcadores ainda nao haviam sido descritos para esta especie vetora. Neste contexto o objetivo deste trabalho foi identificar e padronizar marcadores microssatelites para P. megistus para serem utilizados em analises futuras de genetica de populacoes. O sequenciamento genomico em plataforma Illumina HiSeqX foi utilizado para montagem de reads e posterior busca de microssatelites. Foram identificadas 2.043.690 regioes utilizando o programa MISA, destas, 96 foram selecionadas para a padronizacao da amplificacao, das quais 79 loci amplificaram por PCR utilizando o DNA de seis exemplares de tres localidades distintas (dois insetos de Santana do Riacho/Minas Gerais, dois insetos de Juquia/Sao Paulo, e dois insetos de uma colonia formada por individuos de diferentes localidades de Minas Gerais). Dentre estes, 20 dos 51 loci polimorficos foram utilizados para a determinacao dos alelos por genotipagem em 19 P. megistus provenientes de: Jaboticatubas/MG (15), Santana do Riacho/MG (2) e Juquia/SP (2); e de um exemplar de: Panstrongylus diasi, Panstrongylus lignarius, Triatoma tibiamaculata, e Triatoma sordida. A determinacao dos alelos foi possivel em 19 loci, sendo 16 polimorficos. O numero de alelos por locus variou de 1 a 9 com medida de 4,7. A heterozigozidade observada variou de 0,15 a 0,57 enquanto a esperada foi de 0,14 a 0,83 com media de 0,25 e 0,59 respectivamente. Foi possivel observar a amplificacao em outra especie de triatomineo em 12 loci. Dessa forma, a estrategia utilizada mostrou-se eficicaz para o desenvolvimento de marcadores de microssatelites. A proxima etapa sera avaliar a dinamica populacional de infestacoes do ambiente artificial por esta especie.