Diversidade de tripanosomatídeos em pequenos mamíferos provenientes da Estação Biológica FIOCRUZ da Mata Atlântica, Rio de Janeiro

Abstract

Tripanosomatídeos compreendem uma diversidade de protozoários parasitas que podem ser encontrados em diversas espécies de hospedeiros, incluindo os pequenos mamíferos (roedores, marsupiais e morcegos) que possuem papéis importantes nos ciclos de manutenção e transmissão desses parasitas. O diagnóstico molecular da infecção diretamente em tecidos dos seus hospedeiros podem resultar na detecção de espécies de tripanosomatídeos não detectadas em outras técnicas, como culturas, exame a fresco, ou sorologia. O objetivo deste estudo foi diagnosticar molecularmente a infecção e identificar a diversidade de tripanosomatídeos presentes em tecidos de pele, baço e fígado de pequenos mamíferos silvestres provenientes da Estação Biológica Fiocruz Mata Atlântica (EFMA), Rio de Janeiro/RJ, considerada uma área de proteção ambiental com diferentes níveis de degradação. Amostras biológicas de pequenos mamíferos capturados na EFMA foram submetidas anteriormente a outros exames diagnósticos: exames a fresco de sangue, culturas de sangue e tecidos, PCR em tecidos direcionado a infecção por Leishmania sp. e sorologia (RIFI), esta última apenas em amostras de roedores e marsupiais. As amostras de tecidos desses pequenos mamíferos foram submetidas à extração de DNA, seguida de uma reação em cadeia da polimerase (PCRnested) utilizando o marcador 18S rDNA Os produtos amplificados foram sequenciados e analisados por meio de inferência filogenética por máxima verossimilhança. O teste estatístico Qui-quadrado foi aplicado para avaliar a relação entre áreas de coletas com a taxa de infecção dos tripanosomatídeos detectados. Das 422 amostras de tecidos analisadas, 33 (7,8% = 26 indivíduos) foram positivas no diagnóstico molecular. Destas, 22 foram posicionadas filogeneticamente dentro do clado Trypanosoma cruzi: T. cruzi TcI (n=9), Trypanosoma dionisii (n=7), Trypanosoma rangeli A (n=1), Trypanosoma sp. Neobat 1 (n=3) e Trypanosoma sp. Neobat 4 (n=2). As 11 amostras não caracterizadas no nível de espécie foram classificadas como Trypanosomatidae. Dos 26 indivíduos positivos, 15 também haviam sido positivos nos outros testes diagnósticos, no qual o diagnóstico molecular diretamente em tecidos complementou e confirmou os resultados destas outras técnicas. Estes 26 hospedeiros positivos estavam distribuídos por todas as três áreas de captura da EFMA (peridomicílio (n=10), transição (n=10) e mata (n=6)). A análise estatística mostrou que não houve relação entre os diferentes níveis de degradação das áreas de captura com a distribuição dos tripanosomatídeos. A diversidade de tripanosomatídeos encontrada (5 diferentes espécies/genótipos) pode ser considerada elevada, visto que as áreas de coletas são relativamente pequenas, a diversidade faunística não é grande e o nível de influência antrópica é elevado. O diagnóstico molecular diretamente em tecidos se mostrou eficiente, pois além de diagnosticar a infecção por tripanosomatídeos em hospedeiros considerados previamente negativos, também diagnosticou parasitas que até o momento só podem ser detectados por meio do diagnóstico molecular, como os genótipos de Trypanosoma sp. Neobat 1 e 4.