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AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE DE GENES DA VIA DE SINALIZAÇÃO TOLL EM ANOPHELES AQUASALIS INFECTADO POR PLASMODIUM VIVAX.
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Resumen en portugues
A malária é uma doença transmitida por mosquitos anofelinos fêmeas e está presente na maior parte dos países tropicais e subtropicais. Mesmo havendo um grande progresso para controle e eliminação em alguns lugares do mundo, as medidas aplicadas não são totalmente eficazes, além do mais, ainda não foi possível desenvolver vacinas ou terapias eficazes para eliminação da doença. O estudo das interações patógeno-vetor é um ponto importante na busca de novas moléculas que possam ser utilizadas para o desenho de estratégias de controle, tais como o desenvolvimento de drogas e vacinas de bloqueio de transmissão. Neste trabalho, exploramos marcadores imunológicos em Anopheles aquasalis infectados com sangue de paciente com Plasmodium vivax por processo de infecção artificial por membrana. Nós avaliamos a expressão de genes da
via Toll. O supressor da cascata: o gene Cactus, um gene efetor: Cecropina que atua como um peptídeo antimicrobiano; e a serino protease Clip que atua como uma enzima proteolítica. Na avaliação dos genes por qPCR observamos que para Cactus houve maior expressão no 2º dia após a infecção comparado ao grupo não infectado p = 0,0004 período que os oocinetos estão atravessando as células do epitélio do intestino. Avaliando o efeito do silenciamento do gene Cactus na infecção, as médias foram 3.9 e 5 para os grupos dsB3M e dsCactus, respectivamente. Após silenciamento de Cactus observamos uma indução na expressão de Cecropina 36h após silenciamento e uma maior expressão em 48h que foi 4 vezes maior que o grupo dsB33M. A expressão de Clip entre o grupo dsCactus e SI foram bem similares, no grupo SI a expressão em 48h foi 2,6 vezes maior que o grupo não infectado. Nossos dados fornecem informações importantes sobre a participação de Cactus na fase inicial da infecção e uma relação entre o peptídeo antimicrobiano Cecropina e a via Toll.
Resumen en ingles
Malaria is a disease transmitted by Anopheles spp. mosquitoes, which is widespread in most tropical countries. Although great progress has been made in control and elimination in certain parts of the world, effective vaccines and therapies towards elimination and eradication have not yet been developed. To achieve this goal, basic biology studies based on interaction between pathogen and vector are paramount to finding transmission-blocking drugs and vaccines. In our work, we explored immunological markers in Anopheles aquasalis infected with Plasmodium vivax feed by blood of patients through artificial membrane feeding assay. We evaluated gene expression of the suppressor Toll Pathway: Cactus, a gene acts as supressior, Cecropin, a gene the acts as an antimicrobial peptide and serine protease Clip that acts as a cytokine. In the evaluation by qPCR we find that for Cactus there was greater expression on the 2º day after infection compared to the uninfected (p = 0,0004) period that the ookinets are crossing the intestinal epithelial cells. Evaluating the effect of block gene on the infection, the means were 3.9 and 5 for the dsB3M and dsCactus groups, respectively. In the experiments of gene expression after blocking the Cactus gene, we observed an induction on Cecropin expression 36h after silencing an increase of expression, and it was 4 fold greater in 48h in the dsCactus than dsB3M group. Expression’s Clip between group dsCactus and SI was similar, in SI groups the level expression in 48h was 2.6 fold greater than uninfected. Our results provide important information about Cactus participation in the early phase after infection and relationship between the Cecropin antimicrobial peptide and Toll Pathway.
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