Efeitos moduladores dos fibroblastos associados ao câncer e via hedgehog na proliferação celular e angiogênese no carcinoma escamocelular de boca

Abstract

INTRODUÇÃO: O Carcinoma escamocelular de boca (CEB) é uma neoplasia invasiva e que ainda possui alta taxa de mortalidade. Sabe-se que a ativação da via de sinalização Hedgehog (HH), em tecidos adultos, pode resultar em desenvolvimento tumoral. Os fibroblastos associados ao câncer (no inglês, cancer associated fibroblasts - CAF) representam a maior população celular no estroma e favorecerem a progressão tumoral, sendo que a participação da via HH já foi descrita na ativação destas células. HIPÓTESE: CAFs contribuem para a proliferação celular e angiogênese tumoral, através da via de sinalização HH. OBJETIVO: Avaliar a participação de CAFs na ativação da via HH, proliferação celular e angiogênese em CEB. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizadas linhagens de CEB (CAL27, SCC4, SCC9 e HSC3) e culturas primárias de fibroblastos normais da cavidade bucal (NOF) e fibroblastos associados ao câncer. Em CEBs humanos, foi realizada a imunomarcação de S100A4, \03B1-SMA, CD105 e MCM3. A expressão gênica de componentes da via HH foi realizada nas linhagens de CEB e em NOF e CAF. HSC3 e CAL27 foram estimuladas com SHH recombinante e analisada a expressão dos genes PCTH1, GLI1 e GLI2. Foi realizado o ensaio do alamar blue para avaliação da citotoxicidade do GANT61, inibidor de GLI1, em CAL27, NOF e CAF. Meio condicionado (MC) por NOF e MC por CAF (antes e após tratamento com GANT61) foi incubado com CAL27 e, em seguida, avaliada a expressão de genes relacionados à via HH, proliferação e angiogênese. As células CAL27 também foram tratadas com GANT61 e os genes supracitados também foram avaliados. Foi realizado o ensaio do ciclo celular da CAL27 após diferentes estímulos, bem como ensaio de angiogênese utilizando a linhagem endotelial EA.hy926. RESULTADOS: Em CEBs humanos, foi encontrada uma associação positiva entre as proteínas \03B1-SMA e S100A4 e o marcador de proliferação celular, MCM3 assim como entre \03B1-SMA e S100A4 com a proteína CD105, positiva em vasos neoformados. A expressão gênica de componentes da via HH foi observada nas linhagens de CEB, bem como em NOF e em CAF. Nas células tumorais (HSC3 e CAL27), bem como em NOF e CAF, foi observada a marcação de proteínas da via HH, sendo esta menor em NOF. Após estímulo com SHH recombinante, as células HSC3 e CAL27 apresentaram uma maior expressão dos genes da via HH (PTCH1 e GLI1). MC CAF, quando incubado com CAL27, aumentou os níveis de transcritos de genes da via HH (PTCH1, GLI1, GLI2), bem como genes alvo desta cascata que estão envolvidos na proliferação (MYC, Ciclina D1) e angiogênese (HIF-1, VEGF-A). Por outro lado, o MC CAF pós GANT61 impediu o aumento da expressão dos genes supracitados, em diferentes tempos. Ainda, este composto também foi capaz de impedir maiores níveis de expressão dos genes supracitados, após incubação com a CAL27. No ciclo celular, observamos uma maior população de células na fase G0-G1, no grupo tratado com MC CAF, além de uma menor população de células em apoptose. Por fim, observamos que a despeito do tipo de fibroblasto (NOF ou CAF), os fatores secretados por estas células exercem um efeito na indução da angiogênese. CONCLUSÕES: As moléculas secretadas por CAFs podem mediar a ativação parácrina da via HH e contribuir com a proliferação e angiogênese, em CEB.