Abordagens no diagnóstico da malária: análise da variabilidade da proteína PfHRP2 e uso de métodos não invasivos de obtenção de DNA

Abstract

A malária é uma doença febril aguda causada por protozoários do gênero Plasmodium. O diagnóstico padrão-ouro é a microscopia óptica (MO), sendo também utilizados os testes rápidos de diagnóstico (RDT). Porém, tais métodos possuem baixo limite de detecção, cerca de 50 parasitos/μL na MO e 100 parasitos/μL no RDT. O diagnóstico com alvos moleculares e metodologias mais sensíveis é capaz de identificar as infecções com baixa densidade parasitária, mesmo em amostras não convencionais como a saliva. Outro fator crítico no diagnóstico de malária é a presença de isolados com deleção do gene que codifica a PfHRP2, proteína presente na maioria dos RDTs. Para suplementar essas limitações do diagnóstico da malária, este estudo teve como objetivo identificar o perfil de deleção e variabilidade do gene pfhrp2, assim como avaliar a performance de dois métodos moleculares, a PCR em tempo real (qPCR) e Droplet Digital PCR (ddPCR), na detecção de DNA do parasito obtido de amostras de sangue, saliva e swab de indivíduos expostos à malária. Uma proporção de 0% a 14,6% de amostras pfhrp2 negativas foi observada nas regiões analisadas, sendo que apenas 1 amostra com deleção de pfhrp2 foi negativa no teste com o RDT. Foram identificados 10 padrões da sequência de PfHRP2, exclusivos de cada região. As taxas de detecção da qPCR e ddPCR foram similares para amostras de sangue, 96 e 98,7%, e saliva, 72,4 e 75%, respectivamente. Porém, a ddPCR foi capaz de detectar 16% a mais de infecções no swab. Ainda assim, a concordância entre as duas técnicas em relação às amostras de swab foi baixa. Uma alta proporção de infecções mistas foi detectada no sangue e saliva. Este projeto se torna relevante na padronização de protocolos moleculares sensíveis a baixas parasitemias, utilizando fontes alternativas para obtenção de DNA, assim como no monitoramento das taxas de deleção e variabilidade do gene pfhrp2, fator importante na sensibilidade dos RDT utilizados no sistema de saúde.