Estudo da infecção pelo TMEV em culturas de células BHK-21 para avaliar a atividade terapêutica do IFN-Β humano na esclerose múltipla

Abstract

Para testar a atividade biológica do interferon beta (INF-β) no tratamento da esclerose múltipla (EM), é importante que se tenha um modelo animal. Como a infecção pelo vírus da encefalomielite murina de Theiler (do inglês TMEV – Theiler’s Murine Encephalomyelitis Vírus) é capaz de evoluir para uma lesão desmielinizantesimilar a da EM em humanos, este estudo se propõe a estabelecer os parâmetros para avaliar a infecção do TMEV em culturas de células de rim de hamster neonato (do inglês BHK-21– Baby hamster kidney cells). Para tanto foi necessário adaptar a amostra viral TMEV BeAn à cultura BHK-21, estabelecer um ensaio de RT-PCR e padronizar um PCR em tempo real.Também foi construido um vetor plasmidial contendo o gen L* do TMEV para expressãotransitoria em células HEK-293-T e esta construção plasmidial foi utilizada para obtenção de um soro policlonal anti-L* utilizando a metodologia de imunização genética. Como resultados foram obtidos estoques virais de células BHK-21 infectadas pelo TMEV e parte destes estoques foram avaliados quanto à presença de moléculas genômica TMEV, indicativa de replicação viral, por ensaios de RT-PCR e quantificação por PCR em tempo real. Asregiões do genoma do TMEV 3A3B e L* foram aquelas que forneceram melhores resultadosnesta avaliação genômica quantitativa, que deverá ser aplicada para todos os estoques TMEVBHK-21 que foram obtidos. O vetor plasmidial de expressão células HEK-293-T pcDNA4His/Max contendo o gene L* expressou com sucesso transitoriamente esta proteína heteróloga, porém não foi capaz de induzir a formação de anticorpos policlonais anti-L* em coelhos, através da técnica de imunização genética.