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ESTUDO PILOTO DE TRIAGEM USANDO A ANÁLISE DA CURVA DE DISSOCIAÇÃO DE ALTA RESOLUÇÃO SENSÍVEL À METILAÇÃO (MS -HRM) EM SWABS ORAIS PARA DETECTAR A SÍNDROME DE PRADER-WILLI
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Prader-Willi Syndrome
Molecular Diagnostic Techniques
diagnóstico
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Triagem
Metilação de DNA
Fonseca, Letícia Lopes Cabral Guimarães da | Fecha del documento:
2022
Orientador
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Saúde da Mulher da Criança e do Adolescente Fernandes Figueira. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en portugues
A síndrome de Prader-Willi (SPW) é uma desordem genética complexa, caracterizada por deleções, dissomia uniparental materna ou defeito no centro de imprinting no alelo paterno do cromossomo 15. As perdas de funções de genes específicos da região 15q11 afetam múltiplos sistemas corporais. O diagnóstico da SPW é difícil de ser realizado com base apenas no exame clínico e envolve a realização de diversas técnicas de biologia molecular para a completa elucidação da etiologia genética, tornando todo o processo laborioso, demorado e custoso. A realização de um teste molecular que permita um diagnóstico rápido e preciso é de vital importância para um melhor prognóstico para paciente. A coleta bem-sucedida de amostras e a extração de DNA de swabs são alternativas não invasivas e confiáveis, tanto para os pacientes quanto para os profissionais que realizarão a coleta destas amostras. Neste trabalho foi possível demonstrar um método simples de coleta de amostras e extração de DNA, que possui baixo custo, é eficaz, fácil e rápido, que fornece uma quantidade e qualidade suficiente de DNA para a execução do MS-HRM, qPCR e sequenciamento. Uma comparação dos procedimentos de extração mostra que o método simples de extração de NaCl é o mais adequado para extração de DNA de amostra bucal coletada através de swab. Neste trabalho foi demonstrado um método simples de coleta de amostras através do swab e extração de DNA com baixo custo e boa qualidade do DNA.
Resumen en ingles
Prader-Willi syndrome (PWS) is a complex disorder, uniparental by deletions, dissociated from no imprint defect in any of the chromosomes 15. As gene variants of the genetic region of the 15q11 region, the diagnosis of PWS is challenging to perform based on clinical examination alone. It involves the performance of several molecular biology techniques for the complete elucidation of genetics, determining the entire laborious, time-consuming, and costly process. The performance of a molecular test allows a quick diagnosis, which is vital for a better prognosis for the patient. Successful sample collection and DNA collection from swabs are non-invasive alternatives for patients and practitioners performing probable sample collection. In this work, it was possible to demonstrate a simple sample collection and DNA method, which has a low cost, is effective, easy, and fast, and provides a sufficient quantity and quality of DNA for the execution of MS-HRM, qPCR, and sequencing. A comparison of the extraction procedures shows that the simple NaCl extraction method is the most appropriate for extracting DNA from a buccal sample collected via swab. In this work, a simple method for swab sampling and extracting DNA was demonstrated, with low cost and good DNA quality.
Palabras clave en portugues
Síndrome de Prader-WilliTécnicas de Diagnóstico Molecular
Prader-Willi Syndrome
Molecular Diagnostic Techniques
DeCS
Síndrome de Prader-Willidiagnóstico
Técnicas de Diagnóstico Molecular
Triagem
Metilação de DNA
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