Caracterização farmacológica pré-clínica da brailina em modelos experimentais de inflamação e asma

Abstract

A inflamação é um quadro patológico resultante de um conjunto de ações do organismo em resposta a agentes irritantes ou causadores de lesão tecidual; esse quadro pode levar àperda da função do órgão afetado. Entre as diversas doenças inflamatórias respiratórias crônicas, a asma é um importante problema de saúde pública que afeta 334 milhões de pessoas no mundo e mata cerca de 5 pessoas diariamente. O tratamento da asma é baseado na utilização de agonistas β2-adrenérgicos, glicocorticoides e inibidores de fosfodiesterase 4. No entanto, os efeitos adversos a esses medicamentos, sobretudo mediante uso crônico, são as principais limitações terapêuticas enfrentadas pelos pacientes. Os produtos naturais são fontes de moléculas bioativas amplamente empregados no desenvolvimento de novos fármacos; seu uso histórico permanece relevante nos dias atuais. A brailina, uma cumarina natural, apresenta consistentes propriedades anti-inflamatórias associadas a mecanismos que sugerem seu potencial no controle da asma. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi investigar o potencial terapêutico da brailina em modelo murino de asma, bem como seu mecanismo imunomodulador. A atividade imunomoduladora da brailina foi avaliada em cultura de macrófagos estimulados com LPS+INFγ quantificando-se os níveis de nitrito, IL-1β, TNF-α e IL-6. O mecanismo de ação foi investigado pela inibição farmacológica do efeito da brailina pelo antagonista glicocorticoide (RU-486) e por análise in silico de acoplamento molecular. A atividade da brailina por via inalatória foi determinada em modelo experimental de asma induzida por ovalbumina em camundongos C57BL/6 BALB/c, machos, 20-25 g (CEUA/FIOCRUZ/L-IGM-015/2013). Foram realizadas as contagens total e diferencial de células inflamatórias no lavado broncoalveolar (LBA), quantificação de citocinas (IL-4, IL-5 e IL-13), avaliação do filtrado inflamatório e da produção de muco pelas células caliciformes. Em ensaios in vitro, a brailina exibiu atividade supressora dependente da concentração em macrófagos ativados. Brailina (10–40μM) reduziu a produção de nitrito, IL-1β, TNF-α e IL-6 em células J774 e em macrófagos de exsudato peritoneal estimulados com LPS e IFN-γ (p<0,05). Resultados do acoplamento molecular sugeriram que a brailina apresenta uma pose de interação para atuar como um ligante do receptor de glicocorticoide. Corroborando essa ideia, o efeito inibitório da brailina sobre os macrófagos foi prevenido pelo RU486, um antagonista do receptor de glicocorticoide (p<0,05). Além disso, o tratamento com brailina reduziu fortemente a atividade transcricional dependente de NF-κB em células RAW 264.7 (p<0,05). A administração inalatória de brailina (50mg/Kg) reduziu a celularidade total no LBA em 45,32% e reduziu a quantidade de neutrófilos e eosinófilos em relação ao tratamento com veículo (p<0,05); esses efeitos foram similares aos da administração sistêmica de dexametasona (30mg/kg, padrão ouro). A liberação de citocinas tipo Th2 (IL-4, IL-5 e IL 13) também foi reduzida nos animais tratados com brailina ou dexametasona (p<0,05). No tecido pulmonar, a brailina e a dexametasona reduziram o infiltrado de células inflamatórias e diminuíram a produção de muco em relação ao grupo controle (p<0,05) Em conclusão, a brailina promoveu uma importante atividade imunomoduladora em macrófagos via receptor glicocorticoide; ademais, o tratamento inalatório com brailina reduziu diferentes parâmetros da asma experimental em camundongos, indicando que este composto tem potencial para o desenvolvimento de novos fármacos para o controle da asma